實(shí)驗(yàn)性大鼠羊水栓塞后肺組織TPS和CK16表達(dá)的變化及意義.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制AFE大鼠動(dòng)物模型，在注入不同劑量羊水原液和胎糞混合液引起AFE后，應(yīng)用類胰蛋白酶（TPS）和角蛋白16（CKl6）免疫組織化學(xué)方法觀察羊水栓塞大鼠的肺組織，來(lái)研究肥大細(xì)胞被激活后TPS量的變化和肺組織內(nèi)中CK16表達(dá)的變化，探討肥大細(xì)胞參與AFE的病理過(guò)程及在AFE中的作用，探討TPS和CK16在AFE死亡法醫(yī)學(xué)鑒定中的意義。方法：選用待產(chǎn)的雌性wistar大鼠50只（由第三軍醫(yī)大動(dòng)物中心提供）。隨機(jī)分為3組，分別

2、為對(duì)照組（10只，生理鹽水，NS），羊水組（30只，AF），胎糞組（10只，MAF）。建立羊水栓塞動(dòng)物模型。觀察一定時(shí)間后取肺組織，做常規(guī)HE染色和免疫組化做形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果：（1）給動(dòng)物注射不同劑量的羊水原液和胎糞混合液。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)按照3.75m1/kg、2.50m1./kg和1.25m1/kg的標(biāo)準(zhǔn)，靜脈注射羊水原液時(shí)，大鼠可以存活的時(shí)間有明顯差異。按1.25ml/kg注射羊水原液時(shí)，動(dòng)物可以存活1～2h，只有輕微癥狀；按2.5m1

3、/kg靜脈注射羊水原液時(shí)，大鼠存活0.5～1h：按照3.75ml/kg注射羊水原液時(shí)，大鼠一般在0.5h內(nèi)死亡。按2.5m1/kg靜脈注射1％的胎糞，動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀會(huì)更早，癥狀會(huì)更急，常常在15～30min內(nèi)死亡。（2）取肺組織做HE染色，對(duì)照組未見(jiàn)明顯病理改變。實(shí)驗(yàn)組（AF和MAF）的肺組織有不同程度的水腫，血管擴(kuò)張。肺小血管及肺泡壁毛細(xì)血管可見(jiàn)無(wú)結(jié)構(gòu)角化上皮組織、黃色無(wú)定形物質(zhì)（胎糞）及毳毛、粘液等羊水成分。有的毛細(xì)血管內(nèi)可見(jiàn)透明血

4、栓形成，肺實(shí)質(zhì)可見(jiàn)少量出血。在羊水組中血管及支氣管周圍可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有白細(xì)胞（主要為嗜酸性粒細(xì)胞）和巨噬細(xì)胞。胎糞組的肺組織可見(jiàn)明顯的黃色胎糞。（3）TPS免疫組化染色陰性對(duì)照組見(jiàn)少量陽(yáng)性染色細(xì)胞，AF和PAF組TPS染色陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，棕色顆粒存在于細(xì)胞漿中。高倍鏡下可以看到在肥大細(xì)胞周圍有彌散性的TPS染色陽(yáng)性的顆粒，顯示肥大細(xì)胞的脫顆粒效應(yīng)。MAF組TPS量明顯多于AF組，P<0.05（見(jiàn)表1）。（4）肺組織CKl6免疫

5、組化：對(duì)照組少見(jiàn)陽(yáng)性染色物質(zhì)，AF和MAF組有大量CK16染色呈陽(yáng)性，呈棕色絲狀，存在于肺動(dòng)脈或肺泡周圍毛細(xì)血管中，部分肺泡壁也有表達(dá)。鏡下觀察到隨著注射量的升高，CK16染色陽(yáng)性的分布增多，且染色更深。結(jié)論：在這種動(dòng)物模型中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：羊水原液入血的量和成分決定了AFE的癥狀；確認(rèn)AFE時(shí)肺組織內(nèi)有大量CK16表達(dá)，同時(shí)肥大細(xì)胞發(fā)生了脫顆粒反應(yīng)，TPS陽(yáng)性物質(zhì)釋放，TPS的表達(dá)明顯升高。檢測(cè)患者體內(nèi)TPS的變化可能對(duì)確診AFE有很