鹽酸洛拉曲克在體外促進(jìn)人肝癌細(xì)胞HepG-2凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究鹽酸洛拉曲克對(duì)體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG-2的增殖抑制作用和對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2凋亡抑制基因Bcl-2表達(dá)的影響。 方法：MTT比色法觀察鹽酸洛拉曲克對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG-2增殖的抑制作用；用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)其對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG-2凋亡抑制基因Bcl-2的表達(dá)影響。 結(jié)果： 1、實(shí)驗(yàn)前HepG-2細(xì)胞為貼壁的梭形細(xì)胞，細(xì)胞排列緊密，生長(zhǎng)增殖速度快，每2～3天需傳一代；在加入化療藥物鹽酸洛拉曲

2、克12h后鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變?yōu)閳A形，體積變小，細(xì)胞密度增加和細(xì)胞固縮，細(xì)胞膜和核膜完整，線粒體發(fā)生超濃縮和染色質(zhì)進(jìn)行性固縮，并向核周“崩潰”形成一個(gè)或多個(gè)塊狀結(jié)構(gòu)、“致密球體”或向外“發(fā)芽”形成葡萄串樣小球體。24后觀察鏡下視野模糊，細(xì)胞膜損傷、腫脹、裂解。 2、腫瘤細(xì)胞體外藥物敏感性檢測(cè)即MTT法，試驗(yàn)設(shè)立三組藥物即（ADM組、DDP組、鹽酸洛拉曲克組）每組藥物設(shè)立四個(gè)濃度梯度，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組，結(jié)果顯示，鹽酸洛拉曲克對(duì)人肝

3、癌細(xì)胞HepG-2的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用．促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，高濃度組的生長(zhǎng)抑制率可達(dá)80．15%，具有良好的量效關(guān)系，其中高濃度給藥組的抑瘤率最高，其次是中濃度組，對(duì)每個(gè)瘤株均重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性比較好。當(dāng)各組藥物濃度達(dá)到最大時(shí)鹽酸洛拉曲克組與陽性對(duì)照組（ADM組和DDP組）比較其腫瘤細(xì)胞的抑制率分為80．15%、48．12%、51．69%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．013，X2檢驗(yàn)）。 3、免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯

4、示，對(duì)不同濃度鹽酸洛拉曲克作用的肝癌HepG-2細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，未用藥物干預(yù)組（對(duì)照組）陽性細(xì)胞呈棕黃色，染色較深，顆粒分布密集，低濃度組（2μg/ml）與對(duì)照組相比未見明顯區(qū)別，中濃度組（20μg/ml）與高濃度組（200μg/ml）較對(duì)照組陽性細(xì)胞呈淡染，其中高濃度組尤為明顯，顆粒分布疏松。隨著鹽酸洛拉曲克濃度的遞增，凋亡指數(shù)逐漸增加，即腫瘤細(xì)胞迅速減少，而Bcl-2陽性細(xì)胞表達(dá)率逐漸下降。當(dāng)藥物濃度達(dá)到最大時(shí)（200