鬼臼毒素衍生物L(fēng)g-2對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG-2凋亡的誘導(dǎo)作用.pdf

1、目的:研究N-(1-烴氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基氧羰基)-L丙氨酸-4’-去甲-4-脫氧鬼臼酯(Lg-2)對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG-2的誘導(dǎo)凋亡作用及機(jī)制。
　　方法:1、采用MTT法檢測(cè)Lg-2對(duì)HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)Lg-2對(duì)HepG-2細(xì)胞周期和凋亡;3、Hoechs33258染色檢測(cè)Lg-2對(duì)HepG-2細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的影響。4、熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)Lg-2處理

2、后對(duì)HepG-2細(xì)胞凋亡相關(guān)基因p53、bax、bc1-2、p21、caspase3表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:Lg-2對(duì)Hepg-2細(xì)胞增殖具有明顯的劑量和時(shí)間依賴的抑制作用,隨藥物濃度增加,抑制效應(yīng)增強(qiáng),與VP-16處理組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。隨時(shí)間延長(zhǎng),抑制作用逐漸增強(qiáng),12-60h Lg-2處理組與VP-16處理組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。細(xì)胞周期測(cè)定顯示Lg-2作用24和48h后,隨時(shí)間延長(zhǎng)S期細(xì)胞所占比

3、例與對(duì)照組及VP-16組比較均明顯增加,而G2/M期細(xì)胞顯著減少。Hoechst33258染色顯示Lg-2處理組細(xì)胞核固縮,碎裂,呈凋亡樣改變。藥物處理后bc1-2mRNA的表達(dá)呈降低趨勢(shì),而p53、bax、p21、caspase3mRNA的表達(dá)呈增高趨勢(shì),且Lg-2處理組作用優(yōu)于VP-16處理組。
　　結(jié)論:結(jié)果表明Lg-2可能通過(guò)使細(xì)胞周期阻滯在G2期抑制細(xì)胞增殖,使細(xì)胞阻滯在S/G2期。并通過(guò)p53、p21、caspase3