COX-2-ERK參與外周ephrinBs-EphBs信號激活引起的痛覺過敏.pdf

1、目的:大量實(shí)驗(yàn)證明，COX-2在各種原因引起的疼痛過程中發(fā)揮重要作用。以往的研究已經(jīng)證實(shí)外周ephrinBs/EphBs信號參與傷害性信息的調(diào)制，如激活外周ephrinBs/EphBs信號可引起傷害性感受器敏感化及痛覺過敏。COX-2系統(tǒng)是否參與外周ephrinBs/EphBs信號激活所致的外周敏感化和痛覺過敏尚不清楚。本研究的目的是探討外周COX-2在ephrinBs/EphBs信號激活所致的痛覺過敏中的作用及其機(jī)制。
　　

2、方法:
　　 1.為觀察外周注射ephrinB1-Fc引起皮膚COX-2表達(dá)的時(shí)間依賴性, 足底注射ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl），應(yīng)用Western blot方法檢測注射后10分鐘、30分鐘、1、2、4、8、24、48小時(shí)注射部位皮膚COX-2表達(dá)。為觀察外周注射ephrinB1-Fc是否呈劑量依賴性改變注射部位皮膚COX-2表達(dá)，足底注射不同劑量的ephrinB1-Fc（0.02、0.1、0.5 μg/1

3、0 μl），觀察COX-2表達(dá)量變化。
　　 2.為觀察非選擇性COX抑制劑和選擇性COX-2抑制劑對ephrinB1-Fc引起的痛行為表達(dá)的影響，在ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）注射前30分鐘，分別注射不同劑量的非選擇性COX抑制劑和選擇性COX-2抑制劑，非選擇性COX抑制劑ketorolac（0.016，0.08，0.4 μg/10 μl），選擇性COX-2抑制劑sc-58125（0.08，0.4，2

4、μg/10 μl），分別溶于4％的二甲亞砜中，觀察ephrinB1-Fc注射后30分鐘、1、2、4、8、12、24、48小時(shí)熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值。為觀察非選擇性COX抑制劑和選擇性COX-2抑制劑對ephrinB1-Fc引起的痛行為維持的影響，在注射ephrinB1-Fc （0.5 μg/10 μl）1小時(shí)后分別給予非選擇性COX抑制劑和選擇性COX-2抑制劑，觀察注射抑制劑后30分鐘、1、2、4、8、12、24、48小時(shí)

5、熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值。
　　 3.為觀察抑制外周COX-2對ephrinB1-Fc引起的脊髓背角神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)的影響，在ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）注射前30分鐘或注射后1小時(shí)，分別注射非選擇性COX抑制劑或選擇性COX-2抑制劑（非選擇性COX抑制劑ketorolac，0.4 μg/10 μl，選擇性COX-2抑制劑sc-58125，2 μg/10 μl），檢測首次給藥后1.5小時(shí)脊髓

6、背角神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)。
　　 4.為研究外周COX-2是否參與ephrinB1-Fc 引起的外周ERK激活，在注射ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）前30分鐘皮內(nèi)給予非選擇性COX抑制劑或選擇性COX-2抑制劑，采用Western blot方法檢測 ephrinB1-Fc 注射后10分鐘內(nèi)注射部位皮膚p-ERK的表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 1．足底注射ephrinB1-Fc可引起注射部位皮膚

7、COX-2呈時(shí)間及劑量依賴性表達(dá)。
　　 2．預(yù)先分別注射非選擇性COX抑制劑ketorolac（0.016，0.08，0.4 ug/10 μl），選擇性COX-2抑制劑sc-58125（0.08，0.4，2 ug/10 μl），能劑量依賴性阻斷ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）引起的痛覺異常；皮下注射ephrinB1-Fc（0.5 μg/10 μl）1小時(shí)后注射該兩種抑制劑，均能逆轉(zhuǎn)ephrinB1-Fc引起的