心肌梗死后大鼠左心室肌細(xì)胞鉀通道的改變及夾竹桃麻素的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：探討心肌梗死后大鼠左心室肌細(xì)胞鉀通道的改變及夾竹桃麻素的干預(yù)作用。
　　方法:
　　1.選擇體重230～260g健康雄性SD（Sprague Dawley）大鼠共90只，稱重后用10%水合氯醛腹腔注射麻醉并行氣管插管，開胸結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支建立心肌梗死模型，假手術(shù)組（sham組）僅將縫線穿過(guò)前降支而不結(jié)扎。將心肌梗死大鼠隨機(jī)分為2個(gè)亞組，一組接受夾竹桃麻素（15mg/kg/d）灌胃給藥5周，設(shè)為心梗干預(yù)組（MI干預(yù)組

2、），另一組給予等體積生理鹽水灌胃5周，設(shè)為心肌梗死組（MI組）。第6周時(shí)存活并用于實(shí)驗(yàn)的大鼠共32只，將一部分大鼠稱重后行腹腔麻醉，迅速開胸取出心臟，應(yīng)用酶解法分離獲得單個(gè)左心室肌細(xì)胞用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)，其中sham組5只，MI組6只，MI干預(yù)組6只，另一部分大鼠稱取左心室重量并取左心室非梗死區(qū)心肌組織，用于測(cè)定基因表達(dá)，每組各5只。
　　2.采用酶解法分離獲得單個(gè)左心室肌細(xì)胞，應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)記錄三組大鼠左心室肌細(xì)胞膜電容（

3、Cm）和瞬時(shí)外向鉀流（Ito）、穩(wěn)態(tài)外向鉀流（Iss）及內(nèi)向整流性鉀流（Ik1），測(cè)定每一鉗制電壓下的電流幅值并計(jì)算每一鉗制電壓下的電流密度，將每一鉗制電壓下的最大電流密度繪制成電流密度-電壓（I-V）曲線，并計(jì)算Ito的激活、失活時(shí)間常數(shù)。
　　3.采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-qPCR)檢測(cè)左心室肌細(xì)胞Ito通道α亞單位編碼基因Kv4.2 mRNA表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.MI組大鼠（n=5）左室質(zhì)量指

4、數(shù)為（3.19±0.25）mg/g，sham組（n=5）為（2.61±0.32）mg/g，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；MI干預(yù)組（n=5）為（2.72±0.22）mg/g，較MI組顯著降低（P＜0.01），與sham組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。sham組、MI組及MI干預(yù)組間左心室重量、體重比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.Sham組左心室肌細(xì)胞膜電容為（189.91±26.5）pF（n=12），MI

5、組為（248.54±28.13）pF（n=8），二組間比較差異顯著（P<0.01）；MI干預(yù)組為（203.68±19.33）pF（n=9），顯著低于MI組（P<0.01），雖然高于sham組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.Ito：+60mV鉗制電壓時(shí)，MI組電流密度顯著低于sham組，分別為（15.55±1.63）pA/pF（n=8）和（28.36±2.26）pA/pF（n=12）（P<0.01）；MI干預(yù)組為（23.

6、72±2.55）pA/pF（n=9），較MI組電流密度顯著增加（P<0.01），比sham組電流密度顯著降低（P<0.01）。三組Ito的激活電壓均為-30mv，激活時(shí)間常數(shù)分別為（1.41±0.52）ms、（1.57±0.34）ms和（1.21±0.32）ms，失活時(shí)間常數(shù)分別為（17.82±4.33）ms、（20.54±2.95）ms和（19.12±4.58）ms，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4.Iss：三組心肌細(xì)胞

7、Iss在+60mv下電流密度分別為sham組（8.45±0.68）pA/pF（n=12），MI組（8.38±0.45）pA/pF（n=8），MI干預(yù)組（9.05±0.32）pA/pF（n=9），三組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。三組Iss的I-V曲線顯示，在不同鉗制電壓下其電流密度相當(dāng)。
　　5.Ik1：-120mv鉗制電壓下三組的電流密度分別為sham組（16.29±1.18）pA/pF（n=12），MI組為（16.87±0

8、.65）pA/pF（n=8），MI干預(yù)組為（17.34±0.72）pA/pF（n=9），三組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在各鉗制電壓下三組I-V曲線幾乎重疊。
　　6.sham組Kv4.2 mRNA的表達(dá)水平是MI組的（5.35±0.53）倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），是MI干預(yù)組的（1.47±0.14）倍，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而MI干預(yù)組Kv4.2 mRNA的表達(dá)水平則是MI組的（2.82±0.47

9、）倍，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.MI組大鼠左心室質(zhì)量指數(shù)及非梗死區(qū)心肌細(xì)胞膜電容均較sham組明顯增高，應(yīng)用夾竹桃麻素干預(yù)后上述指標(biāo)均顯著下降，表明抑制NADPH氧化酶可減輕心肌梗死后大鼠左心室肌細(xì)胞肥大。
　　2.MI組大鼠非梗死區(qū)心肌細(xì)胞Ito電流密度較對(duì)照組顯著降低，I-V曲線明顯下移，同時(shí)編碼Ito通道α亞單位的Kv4.2 mRNA表達(dá)水平較sham組顯著降低，提示Ito電流密度降低系