21-羥化酶缺乏癥家系的基因突變研究.pdf

1、目的： 21-羥化酶缺乏癥(21-OHD)是先天性腎上腺皮質增生癥(CAtl)中最常見的一種類型，屬于常染色體隱性遺傳性疾病。編碼21-羥化酶的基因(CYP21)位于6號染色體短臂上的HLAⅢ區(qū)域，由無活性的假基因和有活性的真基因組成，真假基因之間有高度同源性。大約95﹪的CYP21基因突變是由于真假基因相互作用引起的，其余5﹪的患者等位基因含有特別的突變，這僅發(fā)生在個別的家庭，它們代表了個別人群中的稀有等位基因。本研究通過對3

2、個21－羥化酶缺乏癥家系進行基因突變分析，明確患者基因突變位點及家系中突變位點的攜帶情況，探討國人21－羥化酶缺乏癥是否存在新的基因突變，從分子遺傳學角度深入探討21－羥化酶缺乏癥的發(fā)病機制。 方法： 4例患者來自3個家系(2例為同胞姐妹)，收集患者及其部分家系成員的外周血，提取基因組DNA。設計出特異性的引物擴增兩個相互重疊的特異性CYP21基因片段，對擴增產(chǎn)物直接測序，測序結果與正常參考序列對比：選取位于CYP21基

3、因上游及下游附近的二核苷酸重復序列(CA)多態(tài)位點D6S273和D6S291進行基因型分析。 結果： 1、以患者及其家系成員和正常人基因組DNA為模板，經(jīng)PCR擴增反應，1﹪瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，紫外光照相均顯示出一條清晰條帶，兩對引物擴增產(chǎn)物大小與預期大小相符，患者兩個PCR擴增條帶和正常人相應片段大小一致，說明患者CYP21基因中沒有大片段的缺失或插入。 2、CYP21基因序列分析共檢測到6種突變類型

4、。家系1中患者CYP21基因存在4種雜合突變：E6cluster、Q318X、A391T、P459H，其中前3種突變串聯(lián)排列于同一條染色體上，P459H突變目前國內外尚未見報道，A391T為罕見突變；家系2中患者CYP21基因存在E6cluster、R483W2種雜合突變，其中R483W為罕見突變類型；家系3中患者第4外顯子存在I172N純合突變。 3、利用微衛(wèi)星D6S273和D6S291多態(tài)性位點對3個家系進行了連鎖分析，所得

5、結果與測序結果相一致。 結論： 1、在3個21-羥化酶缺乏癥家系中共檢測出6種突變類型，其中A391T、R483W為罕見突變類型，P459H為新的突變類型。P459H突變可造成21-羥化酶缺乏癥。 2、這3種突變均不是假基因(CYP21P)的序列，說明在有絲分裂過程中不存在CYP21P到CYP21基因的微小序列轉換，它們的產(chǎn)生可能為隨機突變所致。 3、相同臨床表型的患者其基因型可不同，即同一臨床表型可由不