新復(fù)合雜合突變致17α-羥化酶缺陷癥1例家系研究.pdf

1、背景：
　　17α-羥化酶/17,20-裂鏈酶缺陷癥是先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥（congenital adrenal hyperplasia，CAH）的一種罕見類型，其由于CYP17A1基因突變導(dǎo)致P450c17酶功能缺陷，從而產(chǎn)生高血壓、低血鉀、男性假兩性畸形或女性性幼稚等臨床癥狀。人類CYP17A1基因位于第10號(hào)染色體長臂（10q24.3），它共有8個(gè)外顯子，編碼508個(gè)氨基酸。目前人類基因突變數(shù)據(jù)庫中（http://www.

2、hgmd.org/）已發(fā)現(xiàn)90余種不同的CYP17A1的基因突變類型。國內(nèi)外對(duì)17α-羥化酶缺陷癥的研究主要集中在兩方面：1.通過對(duì)CYP17A1基因進(jìn)行基因測序，在確定基因突變位點(diǎn)后，通過構(gòu)建含有突變位點(diǎn)的重組體，從細(xì)胞水平鑒定基因突變位點(diǎn)對(duì)P450c17酶蛋白功能的影響；2.利用各種生物信息學(xué)軟件以及信息資料庫構(gòu)建P450C17的計(jì)算機(jī)三維結(jié)構(gòu)模型，從而預(yù)測分析基因突變位點(diǎn)對(duì)蛋白的空間結(jié)構(gòu)及功能的影響。
　　目的：
　　

3、該研究的目的是研究我院收治的一例17α-羥化酶/17,20-裂鏈酶缺陷癥患者的CYP17A1基因突變類型。
　　對(duì)象及方法：
　　1．先證者：15歲，社會(huì)性別為女性，基因型46，XY，鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院于2013年收住院，患者表現(xiàn)為原發(fā)性高血壓、假兩性畸形和外陰女性幼稚型?；颊哐?ACTH水平升高，但血、尿皮質(zhì)醇水平明顯降低；性激素六項(xiàng)顯示血FSH、LH水平升高，而雄激素、雌激素水平均明顯降低；且硫酸脫氫表雄酮、17α-羥

4、孕酮水平亦明顯降低。在患者及其家屬知情同意下，同時(shí)抽取患者及其父母、祖父母、外祖父母外周血各2ml。
　　2．用苯酚-氯仿-異戊醇抽提法提取患者及其家屬全血基因組DNA。
　　3．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物純化和DNA測序：設(shè)計(jì)分別包含外顯子1、外顯子2和外顯子3、外顯子4、外顯子5、外顯子5、外顯子6、外顯子7、外顯子8的7對(duì)引物，用ABI Verity96well PCR擴(kuò)增儀分別擴(kuò)增8個(gè)外顯子及外顯子和內(nèi)

5、含子連接區(qū)，并采用Syngene Gene Genius凝膠成像儀進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的純度，用PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒（SK1141生工生物工程（上海）股份有限公司）進(jìn)行 PCR產(chǎn)物回收，回收后產(chǎn)物用 ABI3730XL測序儀進(jìn)行雙向測序。一旦發(fā)現(xiàn)突變的存在，該基因組DNA的PCR片段將會(huì)被放大100倍并同時(shí)進(jìn)行分析以排除基因多態(tài)性。
　　4．測序結(jié)果分析：測序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比（Gene Bank ID：158

6、6）。
　　結(jié)果：
　　1．同義突變：①第1外顯子第46位密碼子存在堿基替換（CAC→CAT， H46H）②第1外顯子第65位密碼子存在堿基替換（TCG→TCT,S65S）。
　　2．無義突變：患者第1外顯子非編碼區(qū)存在堿基替換（T→C）。
　　3．錯(cuò)義突變：第4外顯子第236位密碼子存在堿基替換（GTT→GAT），導(dǎo)致氨基酸 V236D，該突變來自于先證者母親，其外祖父同樣存在該突變，而其父親、祖父母及外祖母為

7、正常序列。
　　4．堿基缺失及移碼突變：第6外顯子第329位密碼子發(fā)生堿基缺失移碼突變（TAC→AA），并提前終止（418TGA）。該突變來源于先證者父親，其祖父同樣存在該突變，而先證者母親、祖母及外祖父母為正常序列。
　　結(jié)論：
　　通過對(duì)先證者及其父母、祖父母、外祖父母基因分析，發(fā)現(xiàn)1個(gè)錯(cuò)義突變（V236D）和一個(gè)堿基缺失移碼突變（Y329K,418X），均為雜合突變。其中Y329K,418X屬于中國人群常見的突變