多重PCR方法快速檢測血流感染患者血培養(yǎng)標本中主要革蘭陰性桿菌方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  建立可同時快速檢測血流感染患者血培養(yǎng)中大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌3種主要革蘭陰性桿菌的多重PCR方法。
  方法:
  回顧性分析福建省立院2014年1月份-2014年6月份202份血流感染患者血培養(yǎng)陽性標本中主要革蘭陰性桿菌的分布情況;通過查找比對GenBank公布的大腸埃希菌O83:H1基因(NC-017634)、肺炎克雷伯桿菌 HS11286基因(NC-016845)、鮑曼不動桿菌Oxa基

2、因(NC-009085),基因保守區(qū)設計各細菌的特異性引物。采用設計的3對細菌特異性引物,用已知標準菌株進行血培養(yǎng),提取血培養(yǎng)瓶中的細菌DNA進行PCR擴增,建立多重PCR方法;用建立的多重PCR方法檢測上述202份革蘭陰性桿菌的血培養(yǎng)標本,鑒定結(jié)果與傳統(tǒng)血培養(yǎng)鑒定結(jié)果進行配對ⅹ2檢驗。
  結(jié)果:
  血流感染患者血培養(yǎng)陽性標本排在前3位的革蘭陰性桿菌為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌,所占比例分別為33.66%、2

3、1.78%、15.35%;建立的多重PCR方法,可擴增出相應的病原體基因,經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳,在特定位置顯示相應目的條帶,特異性強;用傳統(tǒng)鑒定方法和多重PCR方法檢測202份標本,P=0.125>0.01,一致性檢驗 Kappa=0.953,靈敏度為97.2%,特異度為100%,統(tǒng)計結(jié)果兩種方法無差異。
  結(jié)論:
  建立了可同時快速檢測血流感染患者血培養(yǎng)標本中大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌的多重PCR方法,耗時3

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