兩種結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型建立方法.pdf

1、目的：結(jié)直腸癌是一種常見的嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤,位居男性惡性腫瘤第四位,女性惡性腫瘤第三位,每年有超過一百萬人被新診斷為結(jié)直腸癌；近年來隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展、生活方式的改變尤其是飲食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變,結(jié)直腸癌的發(fā)病率與死亡率呈逐年上升的趨勢。結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型的建立,對于了解結(jié)直腸癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移的過程以及正確評估各種藥物及治療方案的療效等都具有重要意義。綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作為一種

2、報告基因(reportergene),受到紫外線或藍光激發(fā)時可自身催化從而形成發(fā)色結(jié)構(gòu)同時激發(fā)出綠色熒光。本研究通過脾包膜下注射法和盲腸原位種植法分別建立裸鼠肝轉(zhuǎn)移模型,比較兩種方法的優(yōu)劣,同時運用熒光成像系統(tǒng),比較顯像的異同,為進一步研究肝轉(zhuǎn)移模型提供方法依據(jù)。
　　 方法：⑴建立鼠SW620-GFP原代細胞株:使用酶消化法將轉(zhuǎn)染GFP的SW620瘤塊消化培養(yǎng),傳代；⑵脾包膜下注射法:將SW620-GFP細胞懸液0.25ml(

3、5*106／只)注射至裸鼠脾包膜下,建立肝轉(zhuǎn)移模型；⑶盲腸原位接種法:將含有SW620-GFP細胞的瘤塊1mm3原位種植于裸鼠盲腸壁,建立盲腸原位移植瘤；⑷體外熒光成像系統(tǒng)及熒光共聚焦顯微鏡評估轉(zhuǎn)移情況:運用體外熒光成像系統(tǒng)及confocal系統(tǒng)評估肝臟轉(zhuǎn)移情況。
　　 結(jié)果：①成功建立表達熒光較強的SW620-GFP細胞；②成功建立脾包膜下裸鼠肝轉(zhuǎn)移模型；③成功建立盲腸原位結(jié)直腸腫瘤模型；④體外熒光成像系統(tǒng)可整體無創(chuàng)觀測盲腸原