NF-κB信號通路介導(dǎo)的神經(jīng)母細胞瘤增殖及侵襲、轉(zhuǎn)移的實驗研究.pdf

1、第一部分NF-κB(p65)，COX-2與MMP-9在神經(jīng)母細胞瘤組織的表達及臨床意義的研究
　　目的：探討NF-κB(p65)，COX-2與MMP-9在神經(jīng)母細胞瘤組織的表達及臨床意義。
　　方法：選取青島大學(xué)附屬醫(yī)院石蠟包埋標本80例神經(jīng)母細胞瘤組織和20例節(jié)細胞神經(jīng)瘤組織病理切片標本，免疫組化檢測神經(jīng)母細胞瘤標本組織和節(jié)細胞神經(jīng)瘤標本組織中NF-κB(p65)，COX-2與MMP-9的表達，并比較年齡、性別、腫瘤大小、

2、腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、有無侵潤等與NF-κB，COX-2與MMP-9的表達的關(guān)系及NF-κB表達與COX-2與MMP-9的表達的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果： NF-κB(p65)，COX，MMP-9表達在神經(jīng)母細胞瘤組織高表達，在節(jié)細胞神經(jīng)瘤組織病理表達量較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。NF-κB(p65),COX-2，MMP-9表達均與患者腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)

3、移、有無侵潤相關(guān)，而與患者年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）；NF-κB(p65)表達與COX-2，MMP-9表達相關(guān)性分析，我們發(fā)現(xiàn)NF-κB(p65)，COX-2，MMP-9蛋白的表達呈明顯正相關(guān)(R=0.626,P﹤0.01 AND R=0.612,P﹤0.01)。
　　結(jié)論：1. NF-κB(p65)，COX-2，MMP-9蛋白在神經(jīng)母細胞瘤均有陽性表達且高于節(jié)細胞神經(jīng)瘤組織；2．NF-κB(p65

4、)，COX-2，MMP-9表達與患者腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無侵潤相關(guān)；3. NF-κB(p65)蛋白表達與COX-2，MMP-9蛋白表達呈明顯的正相關(guān)。
　　第二部分NF-κB信號通路在神經(jīng)母細胞瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用及機制探討
　　目的：探討NF-κB信號通路在神經(jīng)母細胞瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用及機制
　　方法：利用transwell檢測并比較神經(jīng)母細胞瘤細胞細胞QDDQ-NM

5、1高轉(zhuǎn)移及QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細胞系的不同侵襲能力，CCK-8檢測兩株細胞系增殖能力的不同，Western blort檢測NF-κB(p65)和p-IκB表達的差異。用不同濃度(5、10、20、40μmol/L) NF-κB信號通路抑制劑PDTC預(yù)處理QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移及QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細胞系，transwell檢測觀察兩種細胞系侵襲能力變化，Real time PCR,Western blort檢測不同濃度 PDTC預(yù)處理

6、 QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移及QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細胞系NF-κB(p65)，p-IκB，IκB，COX-2，MMP-9表達的差異。選擇神經(jīng)母細胞瘤高轉(zhuǎn)移細胞系QDDQ-NM1，TNF-α不同時間和濃度預(yù)處理QDDQ-NM1，促進NF-κB信號通路活化，Real time PCR及Western blort檢測不同處理下NF-κB(p65)，p-IkBα，IκB，COX-2，MMP-9基因表達變化，transwell檢測細胞系侵襲能力變化

7、。THP-1細胞系誘導(dǎo)產(chǎn)生巨噬細胞和SH-SY5Y細胞系共培養(yǎng)，模擬體內(nèi)腫瘤微環(huán)境，Real time PCR及Western blort檢測不同處理下NF-κB(p65)，p-IkBα，COX-2，MMP-9基因表達變化。
　　結(jié)果：神經(jīng)母細胞瘤細胞細胞QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移細胞系增殖及侵襲能力高于QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細胞系且QDDQ-NM1中NF-κB(p65)和p-IkBα蛋白表達高于QDDQ-NM2（P<0.01）。不同

8、濃度NF-κB抑制劑PDTC預(yù)處理QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移細胞系，隨濃度增大QDDQ-NM1增殖能力和侵襲能力減弱，p-IκB蛋白表達逐漸減弱，COX-2，MMP-9蛋白表達也逐漸減弱（P<0.01）。不同劑量或時間TNF-α預(yù)處理QDDQ-NM1細胞系，p-IkBα蛋白,MMP-9,COX-2蛋白表現(xiàn)出劑量和時間依賴性,不同處理組間細胞侵襲能力差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。PMA處理THP-1細胞系和SH-SY5Y細胞系共培養(yǎng)，共培