茚地那韋和氯喹協(xié)同抑制瘧原蟲生長研究及減毒瘧原蟲株的構(gòu)建.pdf

1、瘧疾流行區(qū)常伴隨著高頻率的人免疫缺陷病毒（HIV-1）的感染。在瘧原蟲和HIV-1共感染人群中，各自化療藥物之間的相互作用可能對疾病的治療結(jié)果產(chǎn)生影響。前期實驗證明許多逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑在體外可以有效抑制人惡性瘧原蟲的生長。因此，有研究報道逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑和抗瘧藥之間相互作用對瘧疾和/或艾滋病的治療有影響。本研究中，分別在體外和體內(nèi)模型上，對逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑——茚地那韋和氯喹在氯喹抗性株和氯喹敏感株中的相互作用進行了研究

2、。在體外，采用SYBR Green I的熒光定量法來檢測藥物的抗瘧活性，用等效線分析法檢測藥物之間的相互作用。結(jié)果顯示茚地那韋和氯喹在體外無論是對惡性瘧原蟲（Plasmodium falciparum）藥物敏感株3D7還是多藥耐藥株Dd2都表現(xiàn)出協(xié)同的作用。進而，研究了茚地那韋和氯喹在小鼠感染模型上的協(xié)同作用。NIH雌性小鼠（～25g）腹腔接種夏氏瘧原蟲（Plasmodium chabaudi）敏感株ASS或抗性株ASCQ感染的紅細胞，

3、接種后第4,24,48,72小時口服給藥。實驗組包括對照組，不同劑量氯喹單獨組，不同劑量茚地那韋單獨組，氯喹和茚地那韋不同濃度比例的聯(lián)合組。第四天，血涂片檢測感染率，結(jié)果表明茚地那韋和氯喹對兩種蟲株的生長都表現(xiàn)出協(xié)同抑制作用，這種協(xié)同效應(yīng)在抗性株中更為明顯。進一步研究了這兩個藥物的聯(lián)合對小鼠轉(zhuǎn)陰率的影響。72只小鼠隨機分成6組（每組12只），腹腔接種2×107感染夏氏瘧原蟲抗性株ASCQ的紅細胞。接種后第三天口服給藥，第一組每天10mg

4、/kg的氯喹連續(xù)給藥4天。第2～5組，每組每天10mg/kg的氯喹聯(lián)合不同劑量的茚地那韋（0.3，0.6，1.2，1.8 g/kg）連續(xù)給藥4天。第6組每天100mg/kg的氯喹連續(xù)給藥4天。接種后第三天開始，每天血涂片直到第九天。結(jié)果表明兩種藥物在合適的劑量搭配時可以100％清除抗性株且無明顯的毒性。結(jié)果提示我們茚地那韋和氯喹的聯(lián)合可作為一種新型的抗瘧藥復(fù)方。
　　 瘧疾仍然威脅著人類的健康。研制安全、價廉和有效的瘧疾疫苗是人

5、類控制乃至根除瘧疾的重要途徑。最理想的瘧疾疫苗是減毒全蟲活疫苗。目前常用的手段是對瘧原蟲進行基因修飾以達到減毒目的。所以，瘧原蟲基因工程的研究變得越來越重要。目前，這方面的研究也取得了很大的成果。在實驗中，在鼠感染模型上對伯氏瘧原蟲（Plasmodium berghei）進行基因修飾從而獲得基因修飾后的瘧原蟲減毒并同時表達MUC1蛋白。將含有P.Berghei毒性相關(guān)基因Rhomboid 1的同源序列和MUC1表達序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染伯氏瘧原