膽汁內(nèi)外引流術(shù)對梗阻性黃疸大鼠腸黏膜膽汁酸受體GP-BAR1及其mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、【研究背景】梗阻性黃疸(以下簡稱梗黃)是臨床實(shí)踐中常見癥狀,后期易發(fā)生膽系感染,形成敗血癥,嚴(yán)重者易并發(fā)多器官功能衰竭。臨床解除膽道梗阻有膽汁內(nèi)引流術(shù)和膽汁外引流術(shù)兩種方式。研究顯示膽汁內(nèi)引流術(shù)使膽汁流入腸道而恢復(fù)膽汁腸肝循環(huán),符合生理代謝,患者體力、營養(yǎng)等恢復(fù)較好;而膽汁外引流導(dǎo)致膽汁完全丟失,雖然解除梗黃,但后期身體機(jī)能恢復(fù)較差,消瘦明顯。研究還表明膽汁內(nèi)外引流系有創(chuàng)手術(shù),梗黃患者術(shù)前實(shí)施膽汁引流可產(chǎn)生并發(fā)癥,甚至錯過最佳手術(shù)時間,

2、抵消可能帶來的良好預(yù)期。因此,臨床上梗黃患者采用何種引流術(shù)至今未形成共識。目前,大量文獻(xiàn)報(bào)道膽汁內(nèi)引流好于膽汁外引流,但具體作用機(jī)制不清。我們系列動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)膽汁內(nèi)引流術(shù)具有恢復(fù)肝Kuffer細(xì)胞免疫功能、改善梗黃形成的內(nèi)毒血癥、糾正分泌紊亂的細(xì)胞因子以及對腸道slgA分泌、Occludin蛋白形成和腸黏膜巨噬細(xì)胞免疫功能等有作用,而膽汁外引流術(shù)上述作用不但不明顯,反而出現(xiàn)免疫功能惡化的趨勢;研究還顯示梗黃除了肝臟功能受損外,腸黏膜功能

3、同樣受到損傷,引起腸內(nèi)細(xì)菌和毒素通過屏障入血,形成腸源性感染,促使內(nèi)源性炎癥因子大量分泌,加重病情,膽汁內(nèi)引流術(shù)可以逆轉(zhuǎn)上述病理改變,而膽汁外引流不能,而兩種引流方法區(qū)別在于膽汁是否在腸道中復(fù)現(xiàn)。近些年文獻(xiàn)報(bào)道膽汁不但有助于物質(zhì)的消化吸收,其中的膽汁酸(bile acids,BAs)可作為信號分子,通過受體途徑調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、能量代謝以及抑制腸內(nèi)細(xì)菌過度增殖等,但對于 BAs作為信號分子在腸道中的作用研究不清。因此,我們假設(shè):BAs作

4、為信號遞質(zhì)與腸黏膜組織中膽汁酸膜受體GP-BAR1結(jié)合,通過其信號通路調(diào)節(jié) GP-BAR1在腸黏膜組織中表達(dá)以及改變腸黏膜屏障功能。
　　【研究目的】觀察梗黃形成與解除過程中,大鼠腸黏膜組織形態(tài)的改變、腸黏膜組織GP-BAR1受體及其mRNA表達(dá)的變化,進(jìn)一步探討膽汁內(nèi)引流術(shù)優(yōu)于膽汁外引流術(shù)的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　【材料與方法】采用成年Sprague–Dawley雄性大鼠60只,隨機(jī)分為4組,即假手術(shù)組(SH,n=15)、膽

5、汁內(nèi)引流組(ID,n=15)、膽汁外引流組(ED, n=15)和梗阻性黃疸組(OJ,n=15)。利用既往成熟的實(shí)驗(yàn)動物模型:首次手術(shù)建立OJ模型和SH模型。術(shù)后第8天在OJ模型基礎(chǔ)上行第2次手術(shù),建立ID模型和ED模型。SH組、OJ組在首次術(shù)后第8天留取標(biāo)本,ID組和 ED組在首次術(shù)后第15天留取標(biāo)本。造模成功后,取末端回腸組織常規(guī)HE染色觀察腸黏膜組織形態(tài)學(xué)變化,采用Western blot法檢測末端回腸黏膜組織GP-BAR1受體蛋白

6、表達(dá),采用RT-PCR方法檢測腸黏膜組織GP-BAR1 mRNA的表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】四組大鼠模型成功建立。Western blot方法檢測膽汁酸受體GP-BAR1在大鼠回腸黏膜組織中有表達(dá)。OJ組大鼠腸黏膜組織膽汁酸受體 GP-BAR1表達(dá)明顯高于SH組(0.641±0.087 vs0.398±0.062,P<0.01);行膽汁外引流后(ED組)腸黏膜組織的GP-BAR1受體表達(dá)稍有下降(ED vs OJ,0.597±0.0

7、93 vs0.641±0.087,P>0.05),但尚未降到SH組水平(ED vs SH,0.597±0.093 vs0.398±0.062,P<0.01);然而,膽汁內(nèi)引流后(ID組)腸黏膜組織GP-BAR1受體表達(dá)明顯下調(diào)(ID vs OJ,0.447±0.057 vs0.641±0.087, P<0.01;ID vs ED,0.447±0.057 vs0.597±0.093,P<0.01),接近于SH組表達(dá)水平(ID vs SH,

8、0.447±0.057 vs0.398±0.062,P>0.05)。OJ組腸黏膜組織GP-BAR1 mRNA明顯高于SH組(OJ vs SH,0.796±0.114 vs0.407±0.072,P<0.01);行外引流后(ED組)表達(dá)稍有減弱(ED vs OJ,0.729±0.134 vs0.796±0.114,P>0.05)但尚未降到假手術(shù)組水平(ED vs SH,0.729±0.134 vs0.407±0.072,P<0.01);行

9、內(nèi)引流后(ID組)GP-BAR1 mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(ID vs OJ,0.483±0.107 vs0.796±0.114,P<0.01;ID vs ED,0.483±0.107 vs0.729±0.134,P<0.01),與假手術(shù)組(SH組)比較無明顯差異(ID vs SH,0.483±0.107 vs0.407±0.072, P>0.05)。
　　【結(jié)論】梗阻性黃疸大鼠腸黏膜組織中GP-BAR1及其mRNA表達(dá)水平明顯增強(qiáng),