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文檔簡介
1、目的:檢測microRNA34a、p53和MDM2在大鼠肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達,探討microRNA34a、p53和MDM2與肺癌發(fā)生之間的關系。
方法:大鼠肺癌模型建立:Wistar大鼠68只,其中60只在左下肺葉支氣管灌注含有MCA和DEN的碘油溶液0.1ml,另8只灌注0.1ml碘油作為對照。不同時期進行處死大鼠,制作成石蠟包埋組織塊,切片HE染色,鏡檢并進行診斷分型,采用熒光實時定量PCR方法進行檢測microR
2、NA34a的表達情況。用免疫組織化學法檢測p53和MDM2的表達情況,利用原位雜交的方法檢測p53和MDM2的mRNA情況,并進行分級,用統(tǒng)計軟件SPSS17.0進行卡方檢驗和相關性統(tǒng)計統(tǒng)計分析。
結果
1.動物模型實驗組有48只大鼠發(fā)生癌變,誘癌率為80%(48/60),癌變的大鼠標本有多個階段病變共存,共獲取支氣管黏膜上皮增生21例,不典型增生13例,原位癌28例,侵襲癌20例,轉移癌16例。對照組未見腫
3、瘤發(fā)生。
2.microRNA34a的表達采用熒光實時定量PCR方法檢測microRAN34a,正常組microRNA34a表達為0.825±0.093;癌旁組織組0.172±0.040;原位癌組織0.037±0..034;浸潤癌0.019±0.005;轉移癌0.003±0.004。實驗組與對照組之間存在差異(p<0.01),實驗組內存在組內差異(p<0.01)。
3.p53基因與其蛋白表達根據半定量評分標準
4、p53基因表達評分為對照組1.04±0.49;癌旁組織組1.96±1.01;癌組織組2.61±1.06;浸潤癌組3.05±1.24;轉移癌組3.83±1.15。組間方差分析F=30.240,p<0.05,對照組和實驗組比較,差異有顯著性(p<0.01)。p53蛋白表達:對照組0.79±0.48;癌旁組織組1.92±1.04;癌組織組2.57±1.09;浸潤癌組2.98±1.48;轉移癌組3.48±1,98,組間方差分析F=21.726,
5、p<0.05,對照組與原位癌組、癌旁組織組、浸潤癌組和轉移癌組差異有顯著性(p<0.01)?;蚝偷鞍椎谋磉_具有一致性(Kappa=0.582,p=0.000)
4.MDM2基因與其蛋白表達根據半定量評分標準MDM2基因表達評分為對照組1.13±1.10;癌旁組織組1.90±1.03;原位癌組織組3.61±0.73;浸潤癌組4.41±1.04;轉移癌組5.30±0.54。組間方差分析F=30.670,p<0.05。MDM2
6、蛋白表達:對照組1.10±1.01;癌旁組織組1.96±1.30;癌組織組3.60±0.81;浸潤癌組4.08±0.81;轉移癌組5.09±0.75,組間方差分析F=26.072,P<0.05。基因和蛋白的表達具有一致性(Pearson's r=-0.681,p=0.000)。
5.microRNA34a、p53和MDM2之間相關性在肺鱗癌組織中,microRNA34a和MDM2 mRNA二者呈負相關(Pearson's
7、r=-0.681,p=0.000);microRNA34a和MDM2蛋白二者呈負相關(Pearson's r=-0.671,p=0.000);microRNA和p53mRNA二者呈負相關(Pearson's r=-0.690,p=0.000);microRNA34a和p53蛋白二者呈負相關(Pearson's r=-0.634,p=0.000);MDM2蛋白和p53蛋白二者呈正相關(Pearson's r=0.609,p=0.000);
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