應用組織芯片研究喉鱗癌和癌前病變中mdm2、P73蛋白表達及其與P53蛋白表達的關(guān)系.pdf

1、目的 近二十年來，外科手術(shù)和放化療技術(shù)的進步并沒有顯著的提高喉癌患者特別是晚期喉癌患者的生存率，患者的復發(fā)轉(zhuǎn)移與其免疫、腫瘤生物學特性有關(guān)，因此了解腫瘤的分子生物學特性，和新的腫瘤特異性標志物，以便于腫瘤的早期診斷，早期干預和基因治療。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多因素多基因多步驟的過程，包括染色體的畸變，癌基因和抑癌基因的突變，細胞周期的紊亂以及凋亡的失控等過程。本實驗目的是使用微陣列技術(shù)研究喉癌和癌前病變標本中mdm2和P73蛋白的

2、表達改變，并與P53蛋白的表達相互比較，分析其和腫瘤惡性度和臨床表現(xiàn)、臨床分期、病理分級的關(guān)系，從而為喉癌的診斷和治療提供理論依據(jù)。 材料與方法： 85例喉癌標本取自1990年4月至2000年12月底于我院耳鼻喉科手術(shù)治療的喉癌患者，男性80例，女性5例年齡36-83歲，中位年齡64歲。所有患者術(shù)前均未行放療或化療。病理證實均為喉鱗狀細胞癌。腫瘤臨床分期：為Ⅰ期17例，Ⅱ期30例，Ⅲ期19例，Ⅳ期18期。病理分型：高分化

3、65例，中分化18例，低分化2例。其中T118例，T233例，T321例，T13例，經(jīng)病理檢查證實發(fā)生頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例，無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者68例。聲門型50例，聲門上型33例，聲門下型2例。對照取同期我院手術(shù)后病理證實喉聲帶癌前病變組織或者良性病變56例，其中喉鱗狀上皮輕度不典型增生15例，中度不典型增生9例，重度不典型增生3例，肉芽組織2例，喉角化病2例，喉乳頭狀瘤3例，聲帶息肉22例。 組織芯片由上海市腫瘤研究所協(xié)助制作；

4、組織微陣列儀(tissuearrayer)：美國BEECHERINSTRUMENTS公司產(chǎn)品，由上海市腫瘤研究所提供。 以免疫組化二步法檢測組織芯片mdm2蛋白和P73蛋白的表達，，并與數(shù)據(jù)庫P53蛋白的表達相比較(同一微陣列的前期實驗結(jié)果)。用STATA8．0SE軟件行統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 1、MDM2組織微陣列中樣本丟失情況 MDM2組織微陣列蠟塊中標本85個，經(jīng)切片和免疫組化染色后脫片或者染色后未見腫

5、瘤細胞結(jié)構(gòu)8例，實際獲得分析樣本77個。對照組經(jīng)過切片和免疫組化染色后脫片或者染色后無細胞結(jié)構(gòu)12例，實際獲得對照組樣本33個。 2、MDM2蛋白在不同組織中的染色情況 77例喉癌組織中MDM2蛋白定位于胞核及胞漿中，顆粒較粗，染色從淺黃色、黃色、深黃色、棕色不等，呈出現(xiàn)彌漫性或局限性分布。結(jié)果顯示在77例喉癌組織中有62例喉癌鱗狀細胞癌中有MDM2蛋白的表達，陽性率為：80．52％，其中強陽性(+++)13例，陽性(+

6、+)22例，弱陽性(+)27例，陰性(-)15例。癌前病變組中MDM2染色陽性率為：63．6％(14／22)，聲帶息肉組MDM2染色陽性率為：54．5％(6／11)，經(jīng)過統(tǒng)計學檢驗，差異有顯著性。 3、MDM2蛋白表達與喉癌組織病理分級、臨床分期及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 MDM2蛋白的表達強度在不同分化程度臨床分期不同臨床分型組間的差異無統(tǒng)計學意義；MDM2蛋白在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間的表達差異無統(tǒng)計學意義。MDM2蛋白的表達在

7、不同性別組間和不同香煙消費組間的差異無統(tǒng)計學意義。手術(shù)后三年生存組的MDM2蛋白表達陽性率(41／52)低于手術(shù)后未能生存三年組(21／25)，但是二者的差別無統(tǒng)計學意義。酗酒患者組MDM2蛋白的表達率71．88％(23／32)低于不酗酒組86．67％(39／45)，二者的差異有統(tǒng)計學意義。 4、P73組織微陣列中樣本丟失情況 P73組織微陣列蠟塊中標本85個，經(jīng)切片和免疫組化染色后脫片或者染色后未見腫瘤細胞結(jié)構(gòu)15例，

8、實際獲得分析樣本70個。對照組56例經(jīng)過切片和免疫組化染色后脫片或者染色后無細胞結(jié)構(gòu)21例，實際獲得對照組樣本35個。 5、P73蛋白在不同組織中的染色情況 70例喉癌組織中P73蛋白定位于胞核及胞漿中，顆粒較粗，染色從淺黃色、黃色、深黃色、棕色不等，呈出現(xiàn)彌漫性或局限性分布。結(jié)果顯示在70例喉癌組織中有33例喉癌鱗狀細胞癌中有P73蛋白的表達，陽性率為：47．1％(33／70)，癌前病變組中P73蛋白表達陽性率為50．

9、0％(11／22)，聲帶息肉組P73蛋白表達陽性率為615％(8／13)癌前病變組，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗差異無統(tǒng)計學意義(P)0．05)。 6、P73蛋白表達與喉癌組織病理分級、臨床分期及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 P73蛋白的表達在不同臨床分期不同、臨床分型組間的差異無統(tǒng)計學意義：P73蛋白在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間的表達差異無統(tǒng)計學意義。P73蛋白的表達在不同性別組間和不同香煙消費、不同酒精消費組間的差異無統(tǒng)計學意義。手術(shù)后三年生存組的P

10、73蛋白表達陽性率(22／45)高于手術(shù)后未能生存三年組(10／25)，但是二者的差別無統(tǒng)計學意義。 7、P73蛋白,P53蛋白，MDM2蛋白表達的相關(guān)性 經(jīng)過統(tǒng)計學檢驗，不同P73染色組間MDM2染色差異有顯著統(tǒng)計學意義，P73陽性組的MDM2表達強度明顯高于P73陰性組，而P53與P73，P53與MDM2的表達無明顯統(tǒng)計學意義上的相關(guān)。 結(jié)論： 1、MDM2蛋白在喉鱗狀細胞癌中普遍表達，而且MDM2蛋