基于《傷寒論》瘀、熱、毒證治理論探討抗炎寶逆轉胃癌細胞多藥耐藥研究.pdf

1、熱邪，瘀血、毒邪三者之間密切相關。熱能蘊毒、瘀血蘊久亦可化毒，從而形成熱瘀毒交夾的病理狀況。因此也增加了疾病的急驟性，纏綿性和疑難性。治療方面，既要熱毒瘀三者并治，又需分清其孰輕孰重、孰先孰后，尋因隸本，抓主要矛盾。
　　 熱灼津液，津液停留而成痰濁，血行被遏而成瘀血，層層相固，凝聚成塊，日以積大，形成癥瘕、腫塊、結節(jié)等。瘀熱毒交結，有形成積聚、癥瘕的病理特點。
　　 傷寒論中存在對熱邪，瘀血、毒邪三種病邪及其之間密切相

2、關的大量闡釋，并運用在疾病的治療過程中。通過本課題理論探討發(fā)現(xiàn)熱邪、瘀血、毒邪三者之間密切相關，瘀熱毒交結是形成積聚、癥瘕的重要病機。同時，熱邪、瘀血、毒邪與腫瘤病理進程中腫瘤細胞多藥耐藥病理機制密切相關。
　　 此外，本課題進一步探討了腫瘤細胞多藥耐藥產(chǎn)生的原因及病理機制。對當前腫瘤多藥耐藥的治療現(xiàn)狀進行了梳理。腫瘤細胞的耐藥性是導致化療失敗的重要因素。多藥耐藥機制是多方面的，目前已知的腫瘤多藥耐藥主要機制有藥物隔離外排，如P

3、-糖蛋白(P-gp)的高表達；藥物代謝，如谷胱甘肽轉移酶解毒作用增強；藥物靶位點改變，如拓撲異構酶Ⅱ水平降低；細胞凋亡調(diào)控，如野生型p53基因的缺乏或突變等。
　　 目前，腫瘤多藥耐藥的逆轉主要有三種措施：西藥逆轉、基因治療及中藥逆轉。西藥逆轉劑由于毒副作用大、療效不肯定，還不能推廣到臨床進行大規(guī)模應用；基因治療尚停留在實驗室研究水平，沒有臨床研究報道，離臨床應用尚有時日；而中藥恰好相反，藥性緩和，毒副作用小，且較多研究表明一些

4、中藥對化療具增效減毒作用，因而可能從中藥中找到高效低毒的MDR逆轉劑。
　　 基于此，本課題研究選取人胃癌普通細胞株SGC7901和耐藥細胞株SGC7901/DDP。其中SGC7901/DDP細胞是通過逐量順鉑(DDP)誘導而成，對DDP有較明顯的耐受性，能在含0.5mg·L-1順鉑的培養(yǎng)液中持續(xù)增殖，且對阿霉素、長春新堿均產(chǎn)生明顯耐藥，具有顯著多藥耐藥特征。本實驗用MTT法測定普通株SGC7901細胞及其耐藥株SGC7901/

5、DDP細胞對DDP的敏感性，DDP治療SGC7901的IC50為0.326mg·L-1，SGC7901/DDP細胞的IC50為1.571mg·L-1，其對DDP的耐受性是SGC7901細胞的4.82倍，表明SGC7901/DDP細胞對DDP有較明顯的耐受性，符合耐藥細胞株特點，說明本研究已成功構建多藥耐藥細胞模型。進而經(jīng)900抗炎寶加味丸干預腫瘤細胞的細胞毒性測定研究發(fā)現(xiàn)，當KYB在培養(yǎng)體系中的濃度為1×10-5g·ml-1時，SGC7

6、901及SGC7901/DDP細胞的存活率分別為91.49％和94.26%，即在此劑量時KYB對SGC7901和SGC7901/DDP細胞無明顯毒性。因此，確定以1×10-5g·ml-1作為KYB非細胞毒性藥物濃度，在此濃度下觀察KYB干預胃癌細胞多藥耐藥的效應及其機制。
　　 當1×10-5g·ml-1KYB與DDP協(xié)同作用時，DDP干預SGC7901/DDP細胞的IC50下降為0.374mg·L-1，耐藥倍數(shù)顯著降低，表明K

7、YB可降低耐藥細胞SGC7901/DDP的存活率，增加其對DDP的敏感性。且KYB對普通細胞株SGC7901亦有增敏作用，增敏倍數(shù)為3.02。
　　 為進一步明確KYB實現(xiàn)逆轉腫瘤細胞多藥耐藥的效應機制，本課題研究著眼于腫瘤多藥耐藥的關鍵環(huán)節(jié)P-gp過度表達開展相關研究。腫瘤多藥耐藥過程中P-gp過度表達可導致抗腫瘤藥物外排增加，使細胞內(nèi)藥物蓄積減少。
　　 通過流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，SGC7901細胞內(nèi)DDP平均熒光強度

8、為1035.71，SGC7901/DDP細胞內(nèi)DDP熒光強度為327.76，較SGC7901細胞低3.16倍（p＜0.05）；SGC7901細胞P-gp表達陽性率為10.81%，SGC7901/DDP細胞P-gp表達陽性率為44.21%，明顯高于普通細胞株（P＜0.01），說明SGC7901/DDP細胞耐藥性的產(chǎn)生及細胞內(nèi)DDP含量的降低與P-gp表達增高所致的細胞內(nèi)藥物隔離外排有關。而研究中以900抗炎寶加昧丸干預后，SGC7901/