兔睪丸缺血再灌注損傷及其保護(hù)措施的機(jī)理研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:基于睪丸扭轉(zhuǎn)建立兔子睪丸缺血再灌注損傷模型,結(jié)合氧化應(yīng)激指標(biāo)及細(xì)胞凋亡因子檢測(cè)探索睪丸缺血預(yù)處理、后處理及聯(lián)合處理對(duì)睪丸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及潛在調(diào)控機(jī)理。
  方法:選擇雄性新西蘭大白兔30只,隨機(jī)分為5個(gè)組:A組:對(duì)照組,暴露右側(cè)精索,不作缺血處理并關(guān)閉;B組:缺血再灌注組(I/R),使用無(wú)創(chuàng)血管夾閉右側(cè)精索致睪丸缺血60min,再灌注3d;C組:預(yù)處理組,缺血再灌注前夾閉精索3次(缺血5min/次+灌注5min/次

2、),夾閉右側(cè)精索致缺血60min,再灌注3d;D組:后處理組,夾閉右側(cè)精索致缺血60min后,進(jìn)行3次缺血再灌注(再灌注5s/次+再缺血5s/次),再灌注3d;E組:聯(lián)合處理組,進(jìn)行缺血再灌注前夾閉精索3次(缺血5min/次+灌注5min/次),夾閉右側(cè)精索致缺血60min后,進(jìn)行3次缺血再灌注(再灌注5s/次+再缺血5s/次),再灌注3d。造模完成后,采用3%巴比妥鈉麻醉兔子后采集血液并分離血清測(cè)定血清睪酮含量;接著分離睪丸組織,按照

3、缺血側(cè)及健側(cè)分組后一部分進(jìn)行裂解后按照MDA、PC、NO、SOD、MPO、GSH-Px酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒所述步驟進(jìn)行檢測(cè)分析表達(dá)水平變化,一部分組織樣本采用Western blot法進(jìn)行檢測(cè)分析Bcl-2,Bax表達(dá)水平,其余組織樣本采用10%中性福爾馬林固定后進(jìn)行HE染色和TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)。
  結(jié)果:與正常對(duì)照A組相比,缺血B組、缺血預(yù)處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組后血清睪酮表達(dá)水平顯著降低;缺血B組、缺血預(yù)

4、處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組術(shù)前與術(shù)后比較發(fā)現(xiàn),血清睪酮表達(dá)水平明顯降低。與正常對(duì)照A組及缺血B組健側(cè)相比,缺血B組缺血側(cè)MDA、PC、NO、SOD、MPO、GSH-Px表達(dá)水平顯著升高;與缺血B組缺血側(cè)相比,缺血預(yù)處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組缺血側(cè)MDA、PC、NO、SOD、MPO、GSH-Px表達(dá)水平顯著降低,且三種處理方式之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。病理染色結(jié)果顯示,與正常對(duì)照A組及缺血B組健側(cè)相比,缺血B組缺血側(cè)睪丸組

5、織內(nèi)大部分生精小管結(jié)構(gòu)被破壞,生精小管內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失,可見(jiàn)凋亡的生精細(xì)胞,間質(zhì)及管腔內(nèi)有淡伊紅色水腫液滲出,凋亡指數(shù)明顯升高,Johnsen評(píng)分顯著降低;與缺血B組缺血側(cè)相比,缺血預(yù)處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組缺血側(cè)睪丸組織生精小管結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞層次清楚,排列整齊,大部分管腔內(nèi)有精子生成,部分小管管腔內(nèi)有少量淡伊紅色水腫液,凋亡指數(shù)明顯降低,Johnsen評(píng)分顯著增加,且三種處理方式之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同樣地,與正常對(duì)照

6、A組和缺血B組健側(cè)相比,缺血B組缺血側(cè)Bcl-2/Bax比值顯著降低;與缺血B組缺血側(cè)相比,缺血預(yù)處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組缺血側(cè)Bcl-2/Bax比值明顯增加并趨近正常水平。
  結(jié)論:缺血預(yù)處理、后處理及聯(lián)合處理可通過(guò)調(diào)控氧化應(yīng)激指標(biāo)及細(xì)胞凋亡水平明顯改善兔睪丸缺血再灌注損傷,且三種處理方式對(duì)睪丸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用相同。不僅為睪丸缺血再灌注損傷的潛在保護(hù)機(jī)理研究提供了重要方法參考,而且為睪丸缺血再灌注損傷的臨

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