表沒食子兒茶素沒食子酸酯對大腸桿菌引起的膀胱上皮感染預(yù)防和治療作用的研究.pdf

1、第一部分：EGCG干預(yù)濃度的選擇及安全性評估
　　目的：觀察不同濃度表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)無菌溶液對正常小鼠膀胱上皮細(xì)胞的影響,探討合適的實驗藥物濃度。
　　方法：昆明雌性小鼠36只,隨機分成6組,PBS對照組和0.5、1,、2、4、8mmol/LEGCG實驗組,每組各6只小鼠;分別灌注PBS緩沖液,和相應(yīng)濃度的EGCG無菌溶液。24h后,獲取標(biāo)本,并進行病理H

2、E染色觀察大體形態(tài)和熒光染色觀察Uroplakins膜蛋白的完整性,并檢測其炎癥因子白介素-6和粒細(xì)胞集落刺激因子的表達。
　　結(jié)果：經(jīng)病理HE及熒光染色顯示,除8mmolEGCG組外,PBS組和其余EGCG組膀胱尿路上皮均未見明顯破壞,8mmol/LEGCG實驗組可引起尿道上皮部分脫落,各組均無炎癥因子的異常表達增高,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：小于或等于4mol/LEGCG溶液對膀胱尿路上皮細(xì)胞的功能和

3、形態(tài)學(xué)均無明顯影響,可視為適宜的干預(yù)。
　　第二部分：關(guān)于EGCG對小鼠膀胱上皮大腸細(xì)菌感染的預(yù)防性作用研究
　　目的：證實表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)在細(xì)菌侵入時對膀胱上皮的預(yù)防性保護作用,并評估其對大腸桿菌的抵抗效果。
　　方法：將健康雌性小鼠隨機分成0.5、1、2、4mmol/LEGCG共4個組,和PBS組,每個分組包括6只小鼠。將PBS緩沖液和不同濃度的

4、EGCG溶液50μl灌注入相應(yīng)組別的小鼠膀胱內(nèi)。24h后,建立小鼠急性細(xì)菌性膀胱感染模型,48h后獲取標(biāo)本,進行HE染色和免疫熒光染色觀察各組膀胱上皮大體形態(tài)和Uroplakins膜蛋白的完整性,并定量測定炎癥相關(guān)因子白介素-6和粒細(xì)胞集落因子的表達水平,根據(jù)各組形態(tài)學(xué)特征和炎癥因子表達水平,觀察各組效果,根據(jù)預(yù)防組結(jié)果遴選治療組濃度。
　　結(jié)果：1、2、4mmol/LEGCG組炎癥因子表達與PBS組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

5、5),此三組炎癥因子表達依次降低,4mmol/L預(yù)防組預(yù)防效果最佳,,形態(tài)學(xué)也符合此規(guī)律。0.5mmol/L預(yù)防組與PBS組相比在炎癥因子表達方面無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),膀胱尿路上皮破壞明顯。根據(jù)預(yù)防組效果遴選1、2、4mmol/L三組作為治療組。
　　結(jié)論：EGCG可以有效抵抗大腸桿菌侵入,表現(xiàn)出良好的抗菌作用,對尿道上皮具有保護作用。
　　第三部分：EGCG對小鼠膀胱上皮大腸細(xì)菌感染的治療性保護作用的研究
　

6、　目的：證實表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)在細(xì)菌侵入后對膀胱上皮的治療性保護作用,并評估其對膀胱上皮修復(fù)的影響。
　　方法：將30只健康雌性小鼠隨機分成PBS組、1、2、4mmol/LEGCG共5個組,每個分組包括6只小鼠,將大腸桿菌懸濁液經(jīng)尿道灌注入膀胱內(nèi)建立膀胱感染模型,48h后向小鼠膀胱內(nèi)再次灌注與組別相應(yīng)濃度的EGCG無菌溶液和PBS緩沖液,7d后處死小鼠,獲取膀胱標(biāo)