雷公藤內(nèi)酯醇對阿爾茨海默病模型大鼠突觸后致密物蛋白N-甲基-D-天門冬氨酸受體亞基2B和突觸后致密物質(zhì)95的影響.pdf

1、目的:
　　 β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的異常代謝及沉積與阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的發(fā)病關(guān)系密切,可引起炎癥反應(yīng)和突觸毒性作用。AD早期即可發(fā)生突觸結(jié)構(gòu)的改變,這種改變早于廣泛的神經(jīng)元變性。突觸后致密物(post synaptic density,PSD)是突觸諸多結(jié)構(gòu)因素中非常敏感易變的一種結(jié)構(gòu),在突觸的可塑性中發(fā)揮著重要作用。雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide

2、,TP)是我國獨創(chuàng)的一種具有抗炎、免疫抑制作用的藥物,TP對AD模型大鼠突觸的可塑性是否有一定保護(hù)作用,國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見報道。本實驗采用凝聚態(tài)Aβ1-40注入大鼠海馬模擬AD模型,主要觀察注射Aβ后海馬突觸后致密物中N-甲基-D-天門冬氨酸受體亞基2B(N-methyl-D-asparate receptor subunit2B,NR2B)和突觸后致密物質(zhì)95(postsynaptic density95,PSD-95)表達(dá)的變化以及T

3、P對其的影響,探討TP對突觸可塑性的保護(hù)機(jī)制,并為尋找防治AD的有效中藥提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.凝聚態(tài)Aβ1-40定向注射入大鼠左側(cè)海馬,建立AD大鼠在體模型,以模擬AD學(xué)習(xí)記憶障礙,膠質(zhì)細(xì)胞增生,部分神經(jīng)元損傷等行為學(xué)和病理學(xué)特征。以同樣方法向大鼠左側(cè)海馬定向注射等量生理鹽水作為對照組。
　　 2.術(shù)后一周行Morris水迷宮實驗,篩選出建模成功的大鼠并隨機(jī)分為模型組和用藥組。用藥組每日腹腔注射

4、TP0.4 mg/kg,共15天,對照組和模型組則每日腹腔注射等容積4％丙二醇溶液,注射時間同用藥組。
　　 3.采用甲苯胺藍(lán)尼氏染色方法觀察各組大鼠海馬注射點附近的組織形態(tài)學(xué)改變；免疫組織化學(xué)和RT-PCR方法觀察各組大鼠海馬中PSD相關(guān)蛋白(NR2B和PSD-95)及其mRNA的表達(dá)情況。
　　 4.采用透射電鏡觀察各組大鼠海馬突觸超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.甲苯胺藍(lán)尼氏染色觀察到大鼠海

5、馬注射Aβ1-40后,光鏡下顯示注射點附近海馬齒狀回背側(cè)顆粒細(xì)胞帶不完整,局部神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,出現(xiàn)彌漫性膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)。用藥組注射點附近神經(jīng)元丟失程度減輕,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)較模型組減少。表明TP可能通過抑制Aβ1-40引起的炎癥反應(yīng),對AD模型大鼠海馬神經(jīng)元起到一定的保護(hù)作用。
　　 2.免疫組織化學(xué)顯色示,用藥組NR2B和PSD-95陽性細(xì)胞數(shù)較模型組均明顯增多(P<0.01,P<0.05),平均光密度較模型組明顯增加(P<0

6、.01),但用藥組NR2B和PSD-95陽性細(xì)胞數(shù)和平均光密度仍比對照組減少和降低(P<0.01)。提示TP可能通過抗炎作用,促進(jìn)AD模型大鼠海馬NR2B和PSD-95蛋白的表達(dá)。
　　 3.RT-PCR結(jié)果表明,用藥組NR2B、PSD-95 mRNA的相對含量與模型組比較明顯升高(P<0.05),但較對照組低(P<0.05,P<0.01)。提示TP可能通過抗炎作用,促進(jìn)AD模型大鼠海馬NR2B和PSD-95基因mRNA的表達(dá)。

7、
　　 4.透射電鏡觀察到模型組海馬神經(jīng)氈內(nèi)突觸數(shù)量較對照組減少,突觸前囊內(nèi)突觸小泡數(shù)量減少且輪廓不清,PSD厚度變薄。用藥組海馬神經(jīng)氈內(nèi)的突觸數(shù)量及突觸前囊內(nèi)的突觸小泡均較模型組增多,PSD亦較模型組增厚。表明TP對Aβ1-40引起的海馬突觸超微結(jié)構(gòu)的損傷有一定的改善作用。
　　 結(jié)論:
　　 TP可減輕AD模型大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)受損的程度,促進(jìn)PSD相關(guān)蛋白(NR2B,PSD-95)及其mRNA的表達(dá),從而對突