大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后海馬區(qū)β-淀粉樣蛋白和突觸后致密物質(zhì)-95的表達(dá).pdf

1、腦缺血再灌注損傷是引起認(rèn)知障礙的主要危險(xiǎn)因素。海馬在人和動(dòng)物學(xué)習(xí)，記憶整合中起重要作用，認(rèn)知障礙與海馬區(qū)神經(jīng)元變性、壞死、缺失有密切關(guān)系。目前國內(nèi)有報(bào)道說β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，Aβ)參與了腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元損傷的病理過程，還有相關(guān)國外報(bào)道表明動(dòng)物和人類Aβ表達(dá)是神經(jīng)元的急性反應(yīng)，并引發(fā)瀑布樣反應(yīng)導(dǎo)致Aβ樣病理改變。另外，突觸后致密物質(zhì)-95(postysynaptic densities-95，PSD-

2、95)參與了腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元損傷的病理過程，本研究采用線栓法建立MCAO模型，用免疫組化方法觀察Aβ、PSD-95在大鼠腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元損傷中的表達(dá)，為臨床防治提供理化基礎(chǔ)。 材料與方法 全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物48只，2-3月體重100～130克(由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為3組：①正常對(duì)照組(n=6)、②假手術(shù)組(n=6)、③缺血再灌注組(n=36)③組對(duì)應(yīng)有(6h、1d、2d、3d、5d、7d)等時(shí)

3、間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n=6。腦缺血再灌注模型的建立：參照I～onga報(bào)道的線栓法建立大鼠MCAOA閉塞/再灌注模型。缺血2小時(shí)后再灌注6h、1d、2d、3d、5d、7d。在不同時(shí)間點(diǎn)，大鼠在10％水合氯醛(0.3g/Kg)腹腔麻醉下左心室插管，在4％多聚甲醛灌流取腦，固定，浸蠟、包埋，連續(xù)切片，分別進(jìn)行HE和A13、PSD-95免疫組化染色(SABC法、DAB顯色)。光鏡下半定量計(jì)數(shù)100μm長度內(nèi)的海馬CAl區(qū)結(jié)構(gòu)完整的正常錐體細(xì)胞數(shù)，利

4、用病理圖文分析系統(tǒng)測(cè)量AB、PSD-95陽性染色相對(duì)吸光度值(A值)。所獲得數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較采用方差分析。 結(jié)果 HE染色和Aβ、PSD-95免疫組化染色結(jié)果顯示，缺血再灌注組3d時(shí)，海馬Cal區(qū)神經(jīng)元開始減少，Aβ陽性細(xì)胞數(shù)開始增加，5d達(dá)高峰，7d開始減少。假手術(shù)組大鼠海馬區(qū)少有PSD-95的活化，再灌注6h組大鼠海馬Cal區(qū)PSD-95陽性細(xì)胞增多并出現(xiàn)高峰，持續(xù)3d，再灌注5d后開始下降。

5、海馬在人和動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶整合中起重要作用，認(rèn)知障礙與海馬列區(qū)神經(jīng)元變性、壞死、缺失有密切關(guān)系。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血再灌注損傷是引起認(rèn)知障礙的主要危險(xiǎn)因素。海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡的過程中有許多神經(jīng)毒性物質(zhì)參與。本實(shí)驗(yàn)通過研究Aβ、PSD-95在大鼠腦缺血再灌注損傷后海馬,區(qū)神經(jīng)元的表達(dá)，來探討腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元損傷的發(fā)病機(jī)制。 本研究發(fā)現(xiàn)了在大鼠MCAO缺血再灌注損傷后Aβ表達(dá)異常增強(qiáng)，Aβ具有神經(jīng)毒性，其毒性可以通過直接作用于細(xì)胞

6、，增強(qiáng)、放大各種傷害性刺激如低糖、自由基的損傷效應(yīng)，破壞細(xì)胞內(nèi)鈣離子的穩(wěn)態(tài)，使神經(jīng)元發(fā)生死亡。國外文獻(xiàn)報(bào)道，在動(dòng)物和人類中Aβ表達(dá)是神經(jīng)元對(duì)損作的急性反應(yīng)，盡管這種損傷只是導(dǎo)致短暫的Aβ代謝破壞，但很可能由此引發(fā)瀑布樣反應(yīng)導(dǎo)致AD樣病理改變。 本研究發(fā)現(xiàn)了在大鼠MCAO缺血再灌注損傷后PSD-95表達(dá)異常增強(qiáng)，這些結(jié)果表明PSD-95可能參與了早期缺血引起神經(jīng)細(xì)胞死亡的變化，暗示某些藥物可通過減弱PSD-95活化來改善缺血性損傷

7、。PSD富含神經(jīng)傳遞質(zhì)受體、離子通道和信號(hào)分子等，認(rèn)為PSD具有突觸后神經(jīng)元接受和傳遞突觸信號(hào)的功能蛋白靶控的重要作用。PSD-95是PSD的一個(gè)主要蛋白，近期研究認(rèn)為它直接參與了缺血信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，說明了PSD-95調(diào)控作用對(duì)突觸功能和神經(jīng)元的存活有明顯的作用。． 總之，Ap和PSD-95參與了大鼠腦缺血再灌注后海馬神經(jīng)元損傷的病理過程，推測(cè)Aβ神經(jīng)毒性作用和PSD-95的活化作用可能是腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元損傷機(jī)制之一，為腦缺