左卡尼汀對(duì)體外高糖培養(yǎng)鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:探討左卡尼汀(L-carnitine，LC)對(duì)高糖損傷鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。
　　 方法:選擇出生1～3d的SD大鼠，取視網(wǎng)膜，0.125％的胰蛋白酶消化制備單細(xì)胞懸液后進(jìn)行體外培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長形態(tài)，采用Thy1.1單克隆抗體和微管相差蛋白-2多克隆抗體(Map2)對(duì)培養(yǎng)4d的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度葡萄糖作用下視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞生長狀況，并計(jì)算細(xì)胞存活率。待細(xì)胞達(dá)80％融合時(shí)

2、進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組如下:正常細(xì)胞培養(yǎng)組（對(duì)照組）、單純LC組、高糖損傷組、LC保護(hù)組、N-乙酰半胱氨酸(NAC)，MTT法檢測各組細(xì)胞活力;流式細(xì)胞儀測各組細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;Hoechst33342染色觀察各組細(xì)胞凋亡率;JC-1染色后采用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞線粒體膜電位的變化。
　　 結(jié)果:體外培養(yǎng)細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)鑒定顯示大部分為Thy1.1及Map2陽性。通過臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)比較不同濃度葡萄糖及不同干預(yù)時(shí)間視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞

3、存活率，最終選擇30mmol/L葡萄糖干預(yù)48h建立高糖損傷模型。MTT結(jié)果顯示高糖損傷組細(xì)胞活性顯著下降（P＜0.01），左卡尼汀保護(hù)組細(xì)胞活力較高糖組顯著提高（P＜0.01）。高糖損傷組ROS水平高于正常細(xì)胞組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），LC保護(hù)組ROS水平顯著低于高糖損傷組(P＜0.01)。高糖損傷組Hoechst33342染色可見大量細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學(xué)改變（如細(xì)胞核致密濃染、核固縮、邊緣化等），細(xì)胞凋亡率顯著高于正常組