核轉(zhuǎn)錄因子SATB1表達(dá)與腎細(xì)胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系及其臨床意義.pdf

1、本文分兩個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分：SATB1表達(dá)影響RCC細(xì)胞生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探討核轉(zhuǎn)錄因子SATB1在不同腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，以及SATB1基因表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、侵襲能力的影響。
　　方法：分別應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR、Western blotting與免疫熒光染色法檢測不同腎癌細(xì)胞系中SATB1的表達(dá)情況。在構(gòu)建靶向沉默SATB1的pGenesil2-SATB1-shRNA和SATB1過表達(dá)真

2、核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-SATB1的基礎(chǔ)上，采用CCK-8比色法評(píng)估調(diào)控SATB1的表達(dá)對(duì)RCC細(xì)胞增殖能力的影響，應(yīng)用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分析RCC細(xì)胞侵襲性的變化。
　　結(jié)果：RCC細(xì)胞中SATB1 mRNA及其蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組細(xì)胞HK-2(P<0.001)，且SATB1在ACHN、A498及786-O中的表達(dá)依次增高。成功構(gòu)建pGenesil2-SATB1-shRNA和pcDNA3.1-SATB1過表達(dá)質(zhì)

3、粒。通過Western blotting和實(shí)時(shí)定量PCR法證實(shí)：shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組786-O細(xì)胞中，SATB1 mRNA及其蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.001)；而SATB1過表達(dá)組ACHN細(xì)胞中，SATB1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均顯著升高(P<0.001)。CCK-8研究結(jié)果顯示：SATB1表達(dá)下調(diào)可顯著抑制786-O細(xì)胞的增殖能力，而SATB1過表達(dá)則可明顯促進(jìn)ACHN細(xì)胞的增殖活性，差異均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)

4、。Transwell研究表明：shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組腎癌細(xì)胞786-O的侵襲能力顯著降低(P<0.001)，而pcDNA3.1-SATB1穩(wěn)轉(zhuǎn)組腎癌細(xì)胞ACHN的侵襲能力則顯著增強(qiáng)(P<0.001)。
　　結(jié)論：核轉(zhuǎn)錄因子SATB1在RCC細(xì)胞中的表達(dá)顯著上調(diào)。SATB1基因過表達(dá)在腎癌細(xì)胞獲得侵襲表型的過程中起關(guān)鍵作用，對(duì)促進(jìn)腎癌侵襲、轉(zhuǎn)移具有重要意義。
　　第二部分：SATB1在ccRCC組織中表達(dá)的臨床意義及其與EMT之間的

5、相關(guān)性研究
　　目的：探討SATB1和EMT標(biāo)志基因在ccRCC組織中的表達(dá)及其相關(guān)性。
　　方法：分別采用免疫組織化學(xué)(IHC)染色、Western blotting及實(shí)時(shí)定量PCR法檢測89例ccRCC組織標(biāo)本中SATB1的表達(dá)情況；應(yīng)用IHC法檢測SATB2及EMT標(biāo)志基因(E-cadherin、ZEB2、vimentin和fibronectin)在ccRCC組織中的表達(dá)，并通過Spearman秩次相關(guān)分析法評(píng)估其與S

6、ATB1表達(dá)之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：IHC結(jié)果顯示89例ccRCC組織中SATB1、SATB2、E-cadherin、ZEB2、vimentin和fibronectin蛋白表達(dá)陽性率分別為46.1％、42.7％、44.9％、51.7％、37.1％和49.4％。與對(duì)照組正常組織相比，腎癌組織中SATB2和E-cadherin的表達(dá)水平均明顯下降，而SATB1和ZEB2表達(dá)水平則顯著升高，且SATB1高表達(dá)與患者腫瘤浸潤深度(P<0

7、.001)、TNM分期(P=0.009)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)(P=0.001)之間具有顯著關(guān)聯(lián)。此外，Spearman秩次相關(guān)分析表明SATB1表達(dá)與ZEB2之間呈顯著正相關(guān)(R=0.262,P=0.013)，而與SATB2、E-cadherin之間則呈明顯負(fù)相關(guān)(R=-0.296,P=0.005;R=-0.427,P<0.001)。
　　結(jié)論：ccRCC組織中，SATB1表達(dá)與EMT標(biāo)志基因蛋白表達(dá)密切相關(guān)，將二者聯(lián)合進(jìn)行分析，對(duì)于