微滴數(shù)字PCR技術(shù)動態(tài)監(jiān)測非小細胞癌患者血漿游離DNA EGFR基因突變.pdf

1、背景:肺癌一直以來都位居全球癌癥相關(guān)死亡的首位。近年來，表皮細胞生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制物(TKIs)被證明對具有EGFR激活突變的晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者具有顯著療效。然而，幾乎所有初始時對EGFR-TKI反應(yīng)良好的患者會在6-12個月內(nèi)出現(xiàn)獲得性耐藥。因此，治療前進行EGFR突變檢測篩選具備EGFR-TKIs治療指征的患者，治療中持續(xù)監(jiān)測EGFR突變狀態(tài)的變化，及時發(fā)現(xiàn)耐藥突變改變治療策略，對延長NSCLC患

2、者的生存及預測預后有重要意義。近些年血漿游離DNA(cfDNA)被認為是一種可能的、代替腫瘤組織用來檢測腫瘤特異性改變的樣本。cfDNA應(yīng)用于臨床EGFR基因突變檢測依賴于高靈敏度的EGFR基因突變檢測技術(shù)的發(fā)展，而Droplet digital PCR(ddPCR)是一種新型的PCR技術(shù)，具有更高的精度、重復性和靈敏度，并且可以實現(xiàn)突變基因的定量檢測。
　　目的:本研究應(yīng)用ddPCR技術(shù)定量監(jiān)測NSCLC患者血漿cfDNA EG

3、FRE19-Dels、L858R及T790M突變，分析檢測結(jié)果與患者對厄洛替尼治療反應(yīng)的相關(guān)性，從而探討ddPCR技術(shù)檢測cfDNA EGFR基因突變應(yīng)用于服用EGFR-TKIs的NSCLC患者隨訪及預測預后的可行性。
　　方法:1、收集2011年1月-2015年5月北京協(xié)和醫(yī)院呼吸內(nèi)科肺癌中心門診就診服用厄洛替尼的非小細胞肺癌患者4ml全血標本（厄洛替尼治療前、厄洛替尼治療中、厄洛替尼疾病進展后），共50人，66份血標本，其中厄

4、洛替尼治療前血標本19份、治療中血標本36份，疾病進展后血標本11份。通過ddPCR技術(shù)檢測血漿中cfDNA EGFR E19-Dels、L858R及T790M突變，與組織對比，計算血漿EGFR基因突變檢測靈敏度和特異度，并分析檢測結(jié)果與患者臨床對厄洛替尼治療反應(yīng)的相關(guān)性。2、回顧分析2007年5月-2015年4月158例北京協(xié)和醫(yī)院呼吸內(nèi)科肺癌中心門診就診曾接受過厄洛替尼治療的非小細胞肺癌患者的臨床資料。將患者根據(jù)EGFR突變類型分為

5、E19-Dels和E21L858R兩組，比較兩組患者服用厄洛替尼后PFS、OS是否有差異，獲得EGFR突變陰性患者使用厄洛替尼的生存曲線。
　　結(jié)果:1、將組織EGFR突變檢測(ARMS法)作為金標準，ddPCR檢測血漿E19-Dels和L858R的靈敏度為41.30％(19/46)，特異度為88.89％(8/9)。與臨床資料結(jié)合，9例患者中8例血漿EGFR突變狀態(tài)變化趨勢與患者臨床對厄洛替尼的治療反應(yīng)相符，僅1例不符。厄洛替尼治

6、療過程中血漿3例檢測出T790M突變陽性，分別出現(xiàn)在根據(jù)RECIST判定為疾病進展前8周、18周及3周。50％(6/12)使用厄洛替尼疾病進展后血漿檢測出T790M突變陽性。2、將把EGFR-TKIs作為一線治療的EGFR基因突變陽性患者分為E19-Dels(+)組13人和L858R(+)組13人，E19-Del(+)組中位PFS為142周，L858R(+)組中位PFS為97周，二者無顯著統(tǒng)計學差異（P=0.113）。21例EGFR基因