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1、目的:探討載脂蛋白M(apo M)基因啟動(dòng)子區(qū)三個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性是否在貴州不同民族之間存在差異,apo M基因多態(tài)性是否影響 apo M轉(zhuǎn)錄活性和表達(dá)水平,apo M啟動(dòng)子區(qū)不同的SNPs對(duì)血脂水平所產(chǎn)生的影響
方法:奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清甘油三酯(TG),膽固醇(TC),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C);應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)對(duì)150例貴
2、州健康漢族,140例貴州健康苗族,140例貴州健康布依族人群血標(biāo)本 apo M啟動(dòng)子區(qū)域C-1065A,T-855C,T-778C進(jìn)行基因多態(tài)性分析,選取不同的SNPs DNA片段插入PMD-19T載體測(cè)序正確后插入PGL3-basic載體,構(gòu)建目的DNA-PGL3-basic載體,轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,用熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定其熒光值。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒測(cè)定血清apo M。
結(jié)果:
?。?)三個(gè)民族
3、間T-855C的基因型和等位基因頻率無明顯差異;在C-1065A位點(diǎn),苗族人群的A等位基因頻率明顯高于漢族(苗族人群:漢族人群=38.9%:30%,p=0.024)和布依族人群(苗族人群:布依族人群=38.9%:28.9%,p=0.012),而漢族與布依族之間無明顯差異;在T-778C位點(diǎn),漢族人群C等位基因頻率明顯高于苗族(漢族人群:苗族人群=12%:5.4%,p=0.005)和布依族人群(漢族人群:布依族族人群=12%:5.4%,p
4、=0.005),而苗族與布依族之間未見差異。同時(shí)發(fā)現(xiàn)三個(gè)位點(diǎn)不存在完全的連鎖不平衡,單倍體型分析顯示漢族的CTC型頻率高于苗族與布依族,苗族的ATT型頻率高于漢族與布依族。
?。?)以三個(gè)位點(diǎn)均未突變?yōu)閷?duì)照(-1065CC,-855TT,-778TT),熒光活性顯示apo M T-778C位點(diǎn)CC型轉(zhuǎn)錄活性明顯低于對(duì)照;對(duì)apo M的表達(dá)水平分析發(fā)現(xiàn)單倍體CTC型apo M水平明顯低于其他基因型,T-778C位點(diǎn)CT+CC型ap
5、o M水平明顯低于TT型。
(3) apo M與血脂相關(guān)分析顯示apo M與HDL-C正相關(guān),血脂比較發(fā)現(xiàn)單倍體CTC型HDL-C明顯低于其他基因型;T-778C位點(diǎn)CT+CC型HDL-C水平明顯低于TT型。
?。?)三個(gè)民族組間apo M和血脂比較發(fā)現(xiàn)漢族TC明顯高于苗族和布依族人群。
結(jié)論:apo M基因啟動(dòng)子區(qū)C-1065A和T-778C位點(diǎn)存在民族差異,貴州漢族人群apo M-778位點(diǎn)C等位基因遺傳
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