2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、中國農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文鴨CD8α分子克隆與多克隆抗體制備及MHCⅠ和β2m的表達姓名:廖定為申請學位級別:碩士專業(yè):獸醫(yī)生物醫(yī)學指導教師:夏春20070501AbstractInordertogetproteincomplexesofMHCIB2mCD8forthefurtherstudiesofduckimmunerespone徹CTLrecognitionoffluevirustheproteinoftheduckCD8nchai

2、n(DuCD8a)andMHCI/IB2mWereexpressed,theantiDuCDSaployclonedantibodieswereproducedTheDuCDSawasamplifiedbyPCRmethodfromthecDNAPCRlibraryofPekingducLTheclonerecombinedvectorwereconslruclwiththePCRproductsandthepGEMTEasyVecto

3、rResultsshowthattheclonedDuCDSa正F205151)has645bpinI∞gIl,codingfora214aminoacidspeptideItsharesa927%aahomologywiththepublishedCD8asequenceofCairinamoschata(Muscovyduck)anda991%aahomologywitIIthatofotherPekingduckTheCD8ase

4、quencesofPekingDucktherearcthreepointmutationsitesAmongtheCD8agenesofPekingDucktherewerenlreepointmutationsites:A—123C,A一367_GT536_CThcmutationsitesofDucD8aarcmostlyinthepsheetsandCDRdistrictsTheexpressionplasmid(pQE30/D

5、uCDSa)containstheDuCD8aWasconstructedandtransformedintoEcolistrainJMl09,whichWasinducedbyIPTGtoexpressrecombinantproteinTheexpressedprotein(rDuCD8a)WaspurifiedandanalyzedbySDSPAGEInordertoproducepolyclonalantibodiestheBa

6、lb/cmicewasimmunizedbytherDuCD8aTheSDSPAGEanalysisshowedthatthemolecularweightis26kDaandthemountsoftheexpressedrDuCD8nis15O%intotalmassofbacterialproteinbythin—layerscanneranalysisThethreedimentional(3D)structuresoftheDu

7、CDgaproteinwereestimatedbyhomologymodelingThe3DstructureofDuCD8aproteinestimatedbyhomologymodelingshowstypicalIgVlikedomainconsistingofnineISsheetswithahelixThis3DstructureWaSsimilarashuman’sbutsomedifferenceagainstmice(

8、eleven15sheets)ELISAresultsrevealedthatthetiterofantiDuCD8aantibodiesWasabout1:I,280,000Atlasttheexpressionplasmid:pET21aIAnplMHCIBSPandpET21a/Anplp2mwasconstructedusingthesequenceofAnpIMHCI—BSPandAnplfjj2mTheSDSPAGEanal

9、ysisshowedthatthemolecularweightofthethreekindsAnpIMHCIBSPareall315kDathemolecularweightoftheAnplf32mis144kDaTheexperimentresultsprovidedapowerfultooltofurtherstudythetetramerictechnologytoidentifyTcellepitopes,moreoveri

10、tpavesthewayfortheestablishmentofthesystemthatdetectscellmediatedimmuneresponseofavianinfluenzavirusandthemolecularmechanismsofthewaterfowlantigenpresentingwithMHCIKeywords:Pekingduck,CD8n,MHCI,prokaryoticexpression,poly

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