甜菜離子注入誘變高糖突變體耐旱性和RAPD標(biāo)記篩選.pdf

1、新疆是我國重要的甜菜產(chǎn)區(qū)，其單產(chǎn)處于全國領(lǐng)先地位。本研究對(duì)通過離子注入誘變獲得的高糖甜菜類型與未經(jīng)離子注入的親本進(jìn)行分子標(biāo)記篩選，繪制遺傳圖譜。目的在于加對(duì)強(qiáng)目標(biāo)基因的選擇和鑒定，為建立甜菜高糖性狀分子標(biāo)記輔助選擇系統(tǒng)，為豐富甜菜種質(zhì)資源、縮短育種年限提供依據(jù)。該文以甜菜離子注入高糖突變體S10和未經(jīng)離子注入親本F104為材料，從甜菜葉片中提取基因組。DNA，對(duì)DNA進(jìn)行RAPD分析，經(jīng)800個(gè)10-核苷酸隨機(jī)引物對(duì)兩個(gè)親本材料及F<,

2、2>的篩選，并對(duì)離子注入誘變的材料進(jìn)行抗旱性分析，通過試驗(yàn)得出以下結(jié)論： 1．比較多種方法建立了適于甜菜基因組DNA提取的方法．改良SDS法，此方法便于較快速簡便的提取甜菜基因組DNA，經(jīng)電泳檢，條帶清晰無降解，OD260/OD280的值在1.6～2.0之間，質(zhì)量符合RAPD要求。 2．本試驗(yàn)對(duì)RAPD反應(yīng)體系中的Taq酶濃度、模板DNA濃度、Mg<'2+>濃度、dNTPs濃度、引物濃度進(jìn)行了逐個(gè)優(yōu)化，建立了本試驗(yàn)的RA

3、PD最佳反應(yīng)體系：(1)反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5min；94℃變性lmin 36℃退火lmin，72℃ 2min 45個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min 4℃保存。 (2)反應(yīng)體系：25u1反應(yīng)液中，10×Buffer(100mmol/L Tris-HCI，100mmol/L KCL)2.5u1；2.5 mmol/L Mg<'2+>；0.20 mmol/LdNDPs；2UTaq酶；引物lul；DNA模板20ng/ul。其擴(kuò)增出的條帶清晰、可靠，

4、重復(fù)性好。 3．本試驗(yàn)選用的800條隨機(jī)引物進(jìn)行篩選，有19條在S10和F104中表現(xiàn)出穩(wěn)定的多態(tài)性，占所選引物的2.3﹪,這說明離子注入誘變并沒有引起誘變體廣泛的變異。 4．本研究初步構(gòu)建了甜菜的RAPD標(biāo)記遺傳圖譜，該圖譜中包括5個(gè)連鎖群，含15個(gè)RAPD標(biāo)記，總長度僅為202.4cM。 5．離子注入誘變體S10與其他甜菜品種在葉綠素含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白幾個(gè)方面比較，初步認(rèn)為在苗期S10抗旱能力較弱。