EMS誘變及篩選草莓抗灰霉病突變體的研究.pdf

1、本試驗(yàn)以草莓(FragariaananassaDuch.)‘幸香’(Sachinoka)試管苗為材料，使用化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯(Ethylmethylsulfonate，EMS)對(duì)草莓葉片所產(chǎn)生的愈傷組織進(jìn)行處理，用草莓灰霉菌培養(yǎng)濾液進(jìn)行離體篩選，期望獲得抗灰霉病突變體材料，從根本上解決‘幸香’草莓生產(chǎn)中存在的灰霉病危害問題，為草莓抗病育種探索一條簡(jiǎn)單可行的新途徑。 為得到適宜誘變的愈傷組織材料，并保證篩選出的愈傷組織能分化出

2、不定芽，首先進(jìn)行了‘幸香’草莓葉片離體再生的研究，包括暗處理、葉齡、濾光膜覆蓋、AgNO3、激素組合等對(duì)葉片再生的影響。結(jié)果表明：暗處理6周的材料再生能力最高，超過6周再生率下降；葉齡在35d以內(nèi)的葉片，隨葉齡的增加再生能力提高；用不同顏色的濾光膜覆蓋時(shí)，紅膜處理因能濾去紫外光、藍(lán)紫光、綠光而再生頻率達(dá)最大，黃膜和綠膜次之，藍(lán)膜對(duì)再生無影響，而紫膜對(duì)再生起顯著抑制作用；添加AgNO3能提高再生能力，濃度為4.0mg/L時(shí)再生率最高，繼續(xù)

3、增加Ag+濃度則使葉片再生率下降；TDZ濃度范圍在2.0～6.0mg/L內(nèi)時(shí)葉片再生頻率差異不大，當(dāng)TDZ濃度過低(1.0mg/L)和過高(8.0mg/L)時(shí)，再生能力顯著降低；不同類型的生長(zhǎng)素的再生效果有很大差異，吲哚類生長(zhǎng)素對(duì)再生均有較好效果，2，4-D效果較差，NAA各濃度處理對(duì)再生能力影響差異較大。 在用EMS對(duì)草莓愈傷組織進(jìn)行誘變處理時(shí)設(shè)置了0.05％、0.1％、0.2％、0.4％、0.8％5個(gè)濃度處理和0.5h、1.

4、0h、2.0h3個(gè)時(shí)間處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著濃度的升高和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，外植體褐變率和死亡率呈上升趨勢(shì)，EMS濃度小于0.4％，處理時(shí)間為1h，是較為適宜的劑量。為探明引起褐變的原因，控制誘變過程中的褐變發(fā)生，對(duì)EMS不同劑量處理后的愈傷組織進(jìn)行了一些生理指標(biāo)測(cè)定，包括PPO活性、總酚含量、保護(hù)酶(SOD、CAT、POD)活性及MDA和游離脯氨酸含量的測(cè)定，結(jié)果表明，EMS處理對(duì)愈傷組織細(xì)胞膜的損傷造成胞內(nèi)活性氧濃度的升高及細(xì)胞清除活

5、性氧能力的失調(diào)是愈傷組織褐變死亡的原因，并進(jìn)一步驗(yàn)證了EMS對(duì)草莓愈傷組織進(jìn)行誘變采用0.4％左右濃度的處理1h是適宜的劑量，在處理完成后的前12h培養(yǎng)中，應(yīng)采取一些抗氧化反應(yīng)的措施以利于愈傷組織的恢復(fù)和生長(zhǎng)。 采用靜置培養(yǎng)草莓灰霉菌20d的培養(yǎng)濾液分別對(duì)愈傷組織進(jìn)行細(xì)胞染色和草莓果實(shí)進(jìn)行田間接種，結(jié)果表明培養(yǎng)濾液在細(xì)胞和植株水平上對(duì)‘幸香’草莓均有毒害，可作為突變體抗性篩選的選擇劑。通過在愈傷組織繼代培養(yǎng)中附加不同濃度毒素粗提