蛇足石杉中石杉堿甲和石杉堿乙的分離純化研究.pdf

1、石衫堿甲(Huperzine A，HupA)是草藥蛇足石杉中存在的天然生物堿，是一種強效、可逆性的乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChE inhibitor)，可以用于治療阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease，AD)和其他記憶障礙病癥，因此成為研究人員關(guān)注的熱點。與石杉堿甲結(jié)構(gòu)相似的石杉堿乙(Huperzine B，HupB)也具有一定的乙酰膽堿酯酶抑制活性，天然石杉堿甲和石杉堿乙及以其骨架來合成的類似物被大量用于藥理、藥效和臨

2、床研究。然而，石杉堿甲和石杉堿乙在石杉科植物中含量很低，藥源植物資源的匱乏已成為發(fā)展新型藥物的瓶頸。科學(xué)利用有限的植物資源非常重要，為此本研究目的是開發(fā)一種快速和低成本的HupA和HupB分離純化工藝，對不同提取和純化的方法進行比較，建立一套精確的檢測和分離方法，并對其中關(guān)鍵的改性劑進行了研究，最后對反相制備色譜分離進行了優(yōu)化。此外，本研究還進行了對蛇足石杉內(nèi)生真菌的篩選和初步活性研究。
　　 1、確定了高效液相色譜檢測HupA

3、和HupB的流動楣條件:0.1％TFA，18％甲醇，1mL/min,該方法快速、準確，證實了不同產(chǎn)地蛇足石衫中的含量差異。研究發(fā)現(xiàn)添加改性劑可以有效改善HupA和HupB的分離，減少拖尾，酸改性劑對流動相pH的調(diào)節(jié)作用對保留時間和分離度有很大影響，三氟乙酸(TFA)是最佳的酸改性劑。
　　 2、比較了傳統(tǒng)浸提、超聲提取和閃式提取法提取HupA和HupB的效果，初步純化用樹脂法和萃取法的差別。超聲提取得率可達75％，操作簡單易放大

4、，更加適合工業(yè)生產(chǎn);較之于其他樹脂，弱極性大孔樹脂SP850吸附解吸效果最好，可以有效濃縮提取液100倍以上，HupA和HupB回收率都在90％以上。
　　 3、優(yōu)化了制備色譜分離HupA和HupB的進樣量和流速，最佳條件:0.1％TFA，流速8mL/min，上樣量40mg，同時得到HupA和HupB純度均在98％以上，總回收率分別為83％和81.8％。
　　 4、從安徽黃山、福建三明的蛇足石杉植株中分離出52株內(nèi)生真菌