蛇足石杉的孢子研究.pdf

1、目的：蛇足石杉是目前治療老年癡呆癥很好的中草藥，但其繁殖尚未取得重大突破，本試驗(yàn)為了弄清其孢子的形態(tài)特征及闡明萌發(fā)障礙的可能原因，為孢粉學(xué)研究及孢子的繁殖提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：顯微鑒定、掃描電鏡、透射電鏡、球磨儀破壁、常規(guī)繁育技術(shù)、組織培養(yǎng)、孢子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)等。
　　結(jié)果：(1)孢子的顯微特征是：孢子囊為腎形，由2-4層細(xì)胞組成，最外層細(xì)胞壁增厚且木栓化，孢子囊內(nèi)有許多散在或成團(tuán)的孢子，扇形、三角形或不規(guī)則狀，孢子壁明顯，可

2、見(jiàn)細(xì)胞核及細(xì)胞器顆粒物。
　　(2)孢子的掃描特征：孢子四面體型，輻射對(duì)稱，上被有烏氏體顆粒，三裂縫，突起，長(zhǎng)度約為孢子半徑的4/5；孢子大小為（19.02-23.70）19.25*26.50（23.32-31.90）μm，外壁光滑無(wú)褶皺，孔穴紋飾。極面觀為鈍三角形，三邊內(nèi)凹，赤道面觀為近半圓或扇形，近極面有三條裂縫及四分體痕，遠(yuǎn)極面具孔穴，大小、深淺不一，多圓形，100μm2的面積內(nèi)有孔穴約0-13個(gè)，輻射區(qū)無(wú)或較少孔穴。

3、>　　(3)孢子的透射特征：孢子囊外層為2-3層囊壁細(xì)胞，其內(nèi)為絨氈層和孢子。孢子呈扇形、類三角形，從外至內(nèi)分別為外壁、內(nèi)壁及細(xì)胞器，主要有生殖核、營(yíng)養(yǎng)核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、大液泡、線粒體等。外壁可分為內(nèi)外兩層。外壁外層顏色較深，較疏松，厚度較均勻，外壁內(nèi)層顏色較淺，內(nèi)壁的顏色較深，薄而致密，裂縫僅延伸至內(nèi)壁，孢子壁整體厚度較均勻，0.08-1.87μm。
　　(4)蛇足石杉孢子的破壁條件：孢子囊存在時(shí)以20hz，在3-4min可達(dá)到多數(shù)微

4、裂，去除孢子囊后25hz、2min或30hz、1min可達(dá)到多數(shù)微裂；另實(shí)驗(yàn)中以粗糙馬尾杉及馬尾杉孢子為對(duì)照進(jìn)行粉碎比較，發(fā)現(xiàn)用鑷子等硬物稍微碰撞即可見(jiàn)有大部分粗糙馬尾杉孢子微裂。用球磨儀在較低頻率如20hz、1min時(shí)即可達(dá)到微裂，甚至碎裂。
　　(5)蛇足石杉的孢子可能含有多肽、糖及苷類、皂苷、有機(jī)酸、酚類、黃酮類、香豆素與內(nèi)酯等成分。
　　(6)升汞滅菌20min以上，孢子囊接種后的污染率較小，無(wú)菌瓶甚至達(dá)到100％。

5、無(wú)菌孢子在PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時(shí)間后未萌發(fā)，無(wú)吸脹且無(wú)菌絲出現(xiàn)。表明孢子壁不透水，孢子內(nèi)也無(wú)內(nèi)生真菌的存在。
　　(7)孢子的浸提液對(duì)2種作物種子萌發(fā)具有一定抑制作用，相同濃度的浸提液對(duì)蘿卜種子萌發(fā)的的抑制作用較強(qiáng)，不同溶劑提取液對(duì)幼苗生根的影響也不同，而植株提取液對(duì)蘿卜和綠豆種子的萌發(fā)有不同程度的促進(jìn)作用。
　　(8)經(jīng)過(guò)不同溶劑的處理，蛇足石杉的孢子壁出現(xiàn)了一些變化，水的影響較?。凰下热┛墒箍籽ㄇ逦?；濃鹽酸和氫氧化鈉均

6、使孢子變成黃色，且孔穴略模糊；而濃硫酸的影響卻較?。婚g苯三酚濃鹽酸反應(yīng)為負(fù)反應(yīng)，未染成紅色，木質(zhì)化程度較低；而蘇丹Ⅲ處理的孢子壁為桔紅色，表明孢子壁為脂質(zhì)化。因此蛇足石杉的孢壁可耐鹽酸、硫酸等無(wú)機(jī)酸及冰醋酸等有機(jī)酸、氫氧化鈉等無(wú)機(jī)堿、氯化鉀等無(wú)機(jī)鹽、高溫，不溶于無(wú)機(jī)酸、堿，略溶于生物透明劑等脂溶性溶劑。
　　結(jié)論：以上蛇足石杉孢子的特征可作為孢子鑒別及分類的依據(jù)；孢子萌發(fā)困難的可能原因?yàn)椋烘咦颖谳^厚且不透水，孢子裂縫處內(nèi)外壁均存在