棘孢木霉T4株task1基因過表達及功能的初步分析.pdf

1、本論文所研究的task1基因為MAPKs家族的成員，在真核細胞信號傳遞網(wǎng)中功能顯著，在前期的研究中發(fā)現(xiàn)task1對生物防治真菌的生防功能具有一定的調(diào)控作用，因此對task1深入研究有利于生物防治真菌在分子方面的內(nèi)在調(diào)節(jié)機制的剖析意義重大。棘孢木霉本身的生物防治能力突出，并含有task1，因此研究野生型棘孢木霉的task1基因表達狀況，對于棘孢木霉調(diào)節(jié)生防能力意義重大。
　　獲得的純化的目的基因task1，成功的整合入表達載體中，構(gòu)

2、建重組的表達載體，通過電轉(zhuǎn)化和真菌共培養(yǎng)等方法，在篩選平板上獲得諸多的陽性的轉(zhuǎn)化子。對于得到的轉(zhuǎn)化子進行分子生物學(xué)分析，在分子鑒定后，選取其中最優(yōu)良的菌株，進行形態(tài)學(xué)、酶學(xué)及生防特性的測定。
　　在對于形態(tài)學(xué)的比較中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)目的基因task1在原始菌株中表達上調(diào)后，轉(zhuǎn)化子的菌絲狀態(tài)、生長和產(chǎn)孢狀況優(yōu)越于原始的野生菌株，并且菌絲纏繞密集，產(chǎn)孢數(shù)優(yōu)于原始菌株，為其2.25倍。在對兩種菌的酶活性測定中，得出轉(zhuǎn)化子的C1、濾紙酶活、CX、

3、β-葡萄糖苷酶等酶活性影響較大，并均有很大的提升。因此，進行了轉(zhuǎn)化子的纖維素酶的實時定量PCR，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化子的纖維素的基因的表達量也有很大的提高，進一步證明酶活性提高原因在task1的上調(diào)作用。在生防對峙實驗中，對選取的兩種病原菌的殺傷能力突出。陽性轉(zhuǎn)化子對立枯絲核菌、西紅柿鐮刀菌、的抑制率分別為74.8％、76.5%，而原始菌株的抑制率則為57.2%、69.15%?？梢钥闯鲫栃赞D(zhuǎn)化子對于立枯絲核菌的抑制率遠高于原始菌株，而對于紅柿鐮刀菌