2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、多不飽和脂肪酸在食品、醫(yī)藥、保健品等領(lǐng)域具有重要作用,它是在一系列酶的作用下由脂酰鏈通過(guò)脫氫和延長(zhǎng)形成的。因此脂肪酸脫氫酶在脂肪酸代謝以及維持細(xì)胞膜正常結(jié)構(gòu)和功能方面有重要作用。隨著越來(lái)越多的脂肪酸脫氫酶基因被克隆,該家族的酶促反應(yīng)和相關(guān)的代謝途徑也越來(lái)越清楚,人們開(kāi)始關(guān)注調(diào)控脂肪酸脫氫酶基因表達(dá)的分子機(jī)制。高山被孢霉(Mortierellaalpina)ATCC16266能夠產(chǎn)生多種不飽和脂肪酸,是重要的工業(yè)生產(chǎn)菌株,由于不飽和脂肪酸

2、脫氫酶基因受多種蛋白因子的調(diào)控,所以為了更好地開(kāi)發(fā)利用此菌,有必要對(duì)其調(diào)控因子進(jìn)行系統(tǒng)地研究。
  為研究Mortierella alpina中調(diào)控多不飽和脂肪酸的合成基因的調(diào)控因子,對(duì)高山被孢霉全基因組序列進(jìn)行tBlastn搜索,找出并克隆了與釀酒酵母、白假絲酵母等Mga2p/Spt23p蛋白家族同源的、潛在的調(diào)控蛋白基因序列(以下簡(jiǎn)稱為maSPT23基因)。為了驗(yàn)證所獲得基因maSPT23的功能,以釀酒酵母INVScl為出發(fā)菌

3、株,利用同源重組的方法構(gòu)建釀酒酵母spt23△mga2△雙基因缺失菌株。以此菌株作為maSPT23基因功能驗(yàn)證的受體菌,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pYES-maSPT23,轉(zhuǎn)入釀酒酵母spt23△mga2△中,進(jìn)行異源表達(dá)。通過(guò)涂布平板實(shí)驗(yàn)表明,maSPT23基因可以在釀酒酵母spt23△mga2△菌中表達(dá),并且可以使缺失株在不加油酸的平板上恢復(fù)生長(zhǎng),表明克隆得到的新基因可以補(bǔ)救釀酒酵母Mga2p/Spt23p的功能,激活△9-脂肪酸脫氫酶的表達(dá)。<

4、br>  為了進(jìn)一步在釀酒酵母中驗(yàn)證maSPT23基因的功能,以及其對(duì)不飽和脂肪酸脫氫酶基因達(dá)表的影響,我們從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了探索:
  1、表型的分析:當(dāng)缺失菌株回補(bǔ)maSPT23基因后,菌株的大小、形態(tài)、質(zhì)地、顏色、氣味等特征均與野生型菌株相似。從而說(shuō)明maSpt23p蛋白可以回補(bǔ)釀酒酵母Mga2p/Spt23p的功能,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。
  2、生長(zhǎng)曲線的測(cè)定:與缺失菌株相比,當(dāng)回補(bǔ)異源maSPT23基因后,回補(bǔ)菌

5、株在以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基中可以恢復(fù)正常生長(zhǎng)。
  3、不同生長(zhǎng)條件對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響:測(cè)定回補(bǔ)菌株在乙醇、低溫等不同外界條件下的生長(zhǎng)變化,通過(guò)生長(zhǎng)曲線結(jié)果分析,外源回補(bǔ)菌株相對(duì)于缺失菌株可以更好的耐受外界環(huán)境刺激。
  4、氣相色譜分析酵母脂肪酸含量,GC分析結(jié)果表明,與缺失菌株相比,回補(bǔ)外源maSPT23基因后,回補(bǔ)菌株胞內(nèi)不飽和脂肪酸含量升高。
  本研究首次克隆了高山被孢霉maSPT23基因,并對(duì)其功能進(jìn)行了初步

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