GATA6啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)與先天性心臟病的關(guān)系研究.pdf

1、目的:探求先天性心臟病(Congential Heart Diseases,CHDs)發(fā)病病因和發(fā)病機(jī)制,進(jìn)而采取有效預(yù)防和治療措施,是本研究的目的和迫切需要解決的難題。目前CHDs的發(fā)病病因及機(jī)制尚未被完全闡明,部分文獻(xiàn)表明GATA6(GATA binding protein6)基因突變與CHDs的發(fā)生有關(guān),有研究表明該基因在腫瘤發(fā)病中存在異常甲基化,但其啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化與CHDs是否相關(guān)尚無(wú)報(bào)道。本研究通過(guò)比較CHDs患兒與非C

2、HDs兒童GATA6mRNA表達(dá)水平及其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài),旨在了解CHDs發(fā)病與GATA6啟動(dòng)子區(qū)域甲基化異常的相關(guān)性。
　　方法:收集CHDs患兒的外周靜脈血液標(biāo)本90例,非CHDs兒童的血液標(biāo)本50例,提取外周血總 RNA(Ribonucleic acid),運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè),循環(huán)閾值(Cycle threshold,Ct值)比較法

3、進(jìn)行mRNA表達(dá)定量分析;同時(shí)提取外周血細(xì)胞DNA(Deoxyribonucleic acid),進(jìn)行重亞硫酸氫鈉修飾,運(yùn)用甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)檢測(cè)GATA6啟動(dòng)子區(qū)域CpG島(CpG island)甲基化狀態(tài);運(yùn)用重亞硫酸氫鈉修飾后測(cè)序(Bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)方法,設(shè)計(jì)特異性引物行克隆測(cè)序,對(duì)GATA6基因每個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化

4、狀態(tài)及程度進(jìn)行檢測(cè),以進(jìn)一步明確兩者的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、GATA6在非CHDs對(duì)照組、CHDs組相對(duì)表達(dá)量(x±s)分別為0.10±0.27,0.01±0.02,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　2、GATA6啟動(dòng)子在非CHDs對(duì)照組、CHDs組均出現(xiàn)甲基化現(xiàn)象,甲基化陽(yáng)性率分別為47％(17/36)、91％(69/76),前者顯著低于后者,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　3、GA

5、TA6在非CHDs對(duì)照組、CHDs組均表現(xiàn)一定程度的異常甲基化,BSP方法檢出陽(yáng)性率分別為50％(5/10)、75％(15/20),兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、GATA6mRNA在CHDs組表達(dá)量減低,提示GATA6可能作為新的異常表達(dá)基因參與CHDs的形成。
　　2、CHDs患兒的GATA6啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平均高于非CHDs組,提示GATA6基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化異常與CHDs發(fā)生相關(guān)