丹紅注射液治療腦缺血大鼠劑量依賴性代謝機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究丹紅注射液用藥劑量與腦缺血大鼠的腦缺血面積之間的量效關(guān)系，并且通過應(yīng)用氨基酸代謝組學(xué)的方法證明藥物劑量變化對(duì)氨基酸差異變量的不同參數(shù)影響以及研究因?yàn)橛盟幰鸬陌被岽x通路的變化，試圖從微觀層面尋找劑量依賴性代謝機(jī)制。
　　方法:將36例SD大鼠分為6組:腦缺血模型組，空白對(duì)照組，丹紅注射液治療組(按照原液稀釋倍數(shù)分為:1DanHong-11ml/kg，iv.qd;2 DanHong-22.5ml/kg, iv.qd;3

2、 DanHong-35ml/kg, iv.qd;4 DanHong-410ml/kg, iv.qd),治療3天后觀察治療前后神經(jīng)功能評(píng)分、腦梗死面積以及體重、腦重的改善情況。采用(OPA)柱前在線衍生高效液相色譜法，建立血清中氨基酸代謝譜的相對(duì)定量分析方法，測(cè)定36例大鼠20種血清游離氨基酸含量，最后采用多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法PCA(Principal Component Analysis)和PLS-DA(Partial LeastSqu

3、ares Discriminant Analysis)以及計(jì)算機(jī)系統(tǒng)工具M(jìn)etPa(MetabolomicsPathway Analysis)和MetaboAnalayst在線分析氨基酸生物數(shù)據(jù)集。
　　結(jié)果:
　　1.治療后丹紅注射液供試藥10ml/kg劑量組能顯著降低神經(jīng)功能評(píng)分，降低腦梗死面積和腦重，增加體重，在1-10ml/kg劑量范圍內(nèi)，劑量與腦梗死面積作用呈負(fù)相關(guān)。
　　2.HPLC-FLD結(jié)果顯示:經(jīng)過色

4、譜分離條件優(yōu)化選擇，選擇流動(dòng)相A-B(95∶5，v/v)1mL/min5℃，熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)為330 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為380 nm條件下，ph=7.95的磷酸鹽緩沖液硼砂緩沖液體系。用HPLC色譜柱可以在30分鐘之內(nèi)將血清氨基酸分離出20個(gè)峰，并可以達(dá)到完全分離。
　　3.經(jīng)主成分分析，各個(gè)組在空間上均能得到很好地分離。經(jīng)pls-da分析，四個(gè)組分別與模型組進(jìn)行比較各得出5、6、7、7個(gè)差異物，且有不同的上調(diào)與下調(diào)趨勢(shì)，第四組的調(diào)

5、節(jié)趨勢(shì)與模型組均相反，谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸三種氨基酸的濃度存在與劑量變化相應(yīng)的量效關(guān)系。
　　4.經(jīng)METPA軟件分析，差異代謝物積聚的代謝通路也發(fā)生了相應(yīng)的變化，與模型組相比，每個(gè)劑量組分別發(fā)現(xiàn)3、2、2和5條代謝途徑，由三條變?yōu)閮蓷l又變?yōu)槲鍡l的多通路調(diào)節(jié)，而且每條通路的作用也發(fā)生了相應(yīng)變化。經(jīng)MetPa和MetaboAnalysts分析所有不同的代謝產(chǎn)物集中地代謝途徑，發(fā)現(xiàn)其中Glycine，serine，threonin

6、e metabolism和Histidine metabolism pathways被確認(rèn)是4個(gè)劑量組之間重疊的代謝通路。
　　結(jié)論:
　　1.丹紅注射液可以減少大鼠腦缺血面積;
　　2.本研究成功建立高效液相色譜優(yōu)化條件，并較好地分離大鼠血清游離氨基酸;
　　3.MCAO大鼠血清游離氨基酸代謝與正常大鼠存在差異;丹紅注射液可以逐漸調(diào)節(jié)大鼠血清氨基酸代謝輪廓譜向正常組轉(zhuǎn)化;
　　4.用藥劑量變化可以引起差異