白藜蘆醇對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦保護(hù)的劑量依賴性作用.pdf

1、目的：
　　采用頸內(nèi)動(dòng)脈栓線法制備大腦中動(dòng)脈阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)腦缺血模型,在缺血再灌注急性期經(jīng)腹腔注射白藜蘆醇(低、中、高劑量分別為10、30、60mg/kg),通過TTC染色法觀察大鼠腦梗死面積,干濕法測定大鼠腦組織含水量,缺血再灌注后第7天,取大鼠腦組織固定包埋,進(jìn)行HE染色。探討在缺血再灌注急性期使用不同劑量的白藜蘆醇對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦保護(hù)的劑量依賴性作

2、用。
　　方法：
　　1.動(dòng)物分組雄性SD大鼠75只,體重220~250g,清潔級(jí)。隨機(jī)分為五組:假手術(shù)組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組15只。
　　2.局造性腦缺血再灌注模型制備大鼠用10％水合氯醛麻醉后,仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上,頸部正中切口,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈,用玻璃分針輕輕剝離迷走神經(jīng)。頸外動(dòng)脈切口,插入MCAO栓線,轉(zhuǎn)過頸總動(dòng)脈分叉進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈,然后緩緩插入,至有輕微阻力時(shí)為止(自

3、分叉處約20mm)阻斷大腦中動(dòng)脈的所有血供。缺血90min后,輕輕拔出MCAO栓線,恢復(fù)血供進(jìn)行再灌注,縫合傷口,把大鼠放入籠中。在實(shí)驗(yàn)過程中使用加熱電毯保持動(dòng)物直腸體溫(37±0.5)℃左右。我們通過這種方法制備的模型,大鼠神經(jīng)元損傷比較穩(wěn)定,說明這種方法是可復(fù)制的。
　　3.TTC染色測定梗死范圍缺血再灌注后1h腹腔注射白藜蘆醇(低、中、高劑量分別為10、30、60mg/kg)。再灌注后24h,大鼠經(jīng)水合氯醛麻醉后,迅速斷頭取

4、腦,切成2mm厚的腦片,共5片。置于2%的TTC染液中37℃染色30min顯示腦梗死范圍。
　　4.腦組織含水量測定大鼠腦缺血再灌注24h后,快速斷頭取缺血側(cè)腦組織稱濕重,然后放入100℃恒溫烤箱中24h,烤干,再稱腦組織干重。按干-濕重法公式:(濕重-干重)/濕重×100%計(jì)算腦組織含水量。
　　5.海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)觀察在缺血再灌注后第7天,在水合氯醛麻醉下,經(jīng)心臟灌注200ml4℃的0.1M磷酸鹽緩沖液200ml,再灌注

5、200ml4%多聚甲醛固定至大鼠四肢僵硬,取出大腦放入相應(yīng)固定液中于4℃冰箱中固定過夜。截取視交叉至大腦橫裂的部分,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)冠狀切片,片厚4μm,石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后進(jìn)行 HE染色,在放大倍數(shù)為100倍的顯微鏡下,觀察海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài),并計(jì)數(shù)長度為1mm的海馬CA1區(qū)異常錐體神經(jīng)元的數(shù)量。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示,兩組比

6、較用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05認(rèn)為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.在假手術(shù)組動(dòng)物,未發(fā)現(xiàn)有梗死灶。局造性腦缺血90min再灌注24h,模型組大鼠缺血側(cè)可見明顯的白色缺血梗死灶,白藜蘆醇各劑量組均可以明顯縮小腦梗死體積并改善大鼠的行為學(xué)障礙。
　　2.腦水腫是缺血后腦組織死亡的主要原因之一,白藜蘆醇可以減輕缺血引起的腦水腫。和假手術(shù)組比較,缺血再灌注導(dǎo)致模型組大鼠腦組織含水量明顯升高。而白藜蘆醇各劑量組大鼠腦