白藜蘆醇對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦保護(hù)的劑量依賴性作用.pdf

1、目的：
　　采用頸內(nèi)動(dòng)脈栓線法制備大腦中動(dòng)脈阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)腦缺血模型,在缺血再灌注急性期經(jīng)腹腔注射白藜蘆醇(低、中、高劑量分別為10、30、60mg/kg),通過TTC染色法觀察大鼠腦梗死面積,干濕法測(cè)定大鼠腦組織含水量,缺血再灌注后第7天,取大鼠腦組織固定包埋,進(jìn)行HE染色。探討在缺血再灌注急性期使用不同劑量的白藜蘆醇對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦保護(hù)的劑量依賴性作

2、用。
　　方法：
　　1.動(dòng)物分組雄性SD大鼠75只,體重220~250g,清潔級(jí)。隨機(jī)分為五組:假手術(shù)組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組15只。
　　2.局造性腦缺血再灌注模型制備大鼠用10％水合氯醛麻醉后,仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上,頸部正中切口,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈,用玻璃分針輕輕剝離迷走神經(jīng)。頸外動(dòng)脈切口,插入MCAO栓線,轉(zhuǎn)過頸總動(dòng)脈分叉進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈,然后緩緩插入,至有輕微阻力時(shí)為止(自

3、分叉處約20mm)阻斷大腦中動(dòng)脈的所有血供。缺血90min后,輕輕拔出MCAO栓線,恢復(fù)血供進(jìn)行再灌注,縫合傷口,把大鼠放入籠中。在實(shí)驗(yàn)過程中使用加熱電毯保持動(dòng)物直腸體溫(37±0.5)℃左右。我們通過這種方法制備的模型,大鼠神經(jīng)元損傷比較穩(wěn)定,說明這種方法是可復(fù)制的。
　　3.TTC染色測(cè)定梗死范圍缺血再灌注后1h腹腔注射白藜蘆醇(低、中、高劑量分別為10、30、60mg/kg)。再灌注后24h,大鼠經(jīng)水合氯醛麻醉后,迅速斷頭取

4、腦,切成2mm厚的腦片,共5片。置于2%的TTC染液中37℃染色30min顯示腦梗死范圍。
　　4.腦組織含水量測(cè)定大鼠腦缺血再灌注24h后,快速斷頭取缺血側(cè)腦組織稱濕重,然后放入100℃恒溫烤箱中24h,烤干,再稱腦組織干重。按干-濕重法公式:(濕重-干重)/濕重×100%計(jì)算腦組織含水量。
　　5.海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)觀察在缺血再灌注后第7天,在水合氯醛麻醉下,經(jīng)心臟灌注200ml4℃的0.1M磷酸鹽緩沖液200ml,再灌注

5、200ml4%多聚甲醛固定至大鼠四肢僵硬,取出大腦放入相應(yīng)固定液中于4℃冰箱中固定過夜。截取視交叉至大腦橫裂的部分,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)冠狀切片,片厚4μm,石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后進(jìn)行 HE染色,在放大倍數(shù)為100倍的顯微鏡下,觀察海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài),并計(jì)數(shù)長(zhǎng)度為1mm的海馬CA1區(qū)異常錐體神經(jīng)元的數(shù)量。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示,兩組比

6、較用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05認(rèn)為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.在假手術(shù)組動(dòng)物,未發(fā)現(xiàn)有梗死灶。局造性腦缺血90min再灌注24h,模型組大鼠缺血側(cè)可見明顯的白色缺血梗死灶,白藜蘆醇各劑量組均可以明顯縮小腦梗死體積并改善大鼠的行為學(xué)障礙。
　　2.腦水腫是缺血后腦組織死亡的主要原因之一,白藜蘆醇可以減輕缺血引起的腦水腫。和假手術(shù)組比較,缺血再灌注導(dǎo)致模型組大鼠腦組織含水量明顯升高。而白藜蘆醇各劑量組大鼠腦