二甲雙胍對多囊卵巢綜合征卵巢顆粒細胞胰島素受體底物-1及其磷酸化表達的影響.pdf

1、目的：
　　1.體外分離培養(yǎng)多囊卵巢綜合征（PCOS）和非PCOS患者黃素化顆粒細胞并用卵泡刺激素受體（FSHR)免疫熒光鑒定；
　　2.探討二甲雙胍（Met）對PCOS黃素化顆粒細胞胰島素受體底物-1（IRS-1）及p-ser307-IRS-1的信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表達水平的影響。
　　方法：
　　分離純化體外培養(yǎng)的PCOS和非PCOS組黃素化顆粒細胞用FSHR免疫細胞化學染色鑒定；添加Met處理培養(yǎng)

2、為實驗組，添加類胰島素生長因子-1（IGF-1）為陽性對照組，15％FBS-M199培養(yǎng)基中加入與Met等量PBS培養(yǎng)為陰性對照組；通過RT-PCR和real-time PCR檢測分析IRS-1mRNA的表達，細胞免疫熒光化學方法定性和Western-Blot定量檢測分析IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達。SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理如果p<0.05表示差異有顯著意義。
　　結(jié)果：
　　1.FSHR蛋白免疫細胞

3、化學染色是鑒定顆粒細胞的特異性標記物，F(xiàn)SHR陽性染色定位于細胞胞漿和細胞膜，呈綠色熒光，細胞核呈藍色熒光，鏡下可見FSHR的陽性率大于95%；
　　2.RT-PCR法擴增出IRS-1的片段大小為134bp，real-time PCR分析結(jié)果顯示添加Met對PCOS組黃素化顆粒細胞IRS-1 mRNA表達顯著下調(diào)，與陽性及陰性對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；
　　3.細胞免疫熒光化學檢測IRS-1及p-ser30

4、7-IRS-1蛋白陽性表達定位在顆粒細胞細胞質(zhì)；
　　4.Western-blot檢測Met作用24h后卵巢黃素化顆粒細胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，灰度值分析結(jié)果顯示PCOS組卵巢黃素化顆粒細胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達高于非PCOS組，添加Met組作用24h后PCOS組黃素化顆粒細胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達較非PCOS組顯