多囊卵巢綜合征大鼠骨骼肌細(xì)胞胰島素受體底物1及其絲氨酸307位點(diǎn)磷酸化的表達(dá).pdf

1、摘 要目的：建立較為理想的多囊卵巢綜合征( P C o S ) 骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗( 瓜) 動物模型；通過觀察骨骼肌細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白- 4 ( G L U T - 4 ) 、胰島素受體底物．1 ( m S ．1 ) 、胰島素受體底物．1 絲氨酸3 0 7 磷酸化( p I R S ．1S —0 7 ) 及胰島素受體底物．2 ( I R S ．2 )的表達(dá)，探討其在瓜發(fā)生機(jī)制中的作用。方法：( 1 ) 建立P C O S 大鼠模型：4

2、 0 只S D 雌性大鼠隨機(jī)分為4 組：對照組( C o n t r o l組) 、單純高脂飲食組( H F D 組) 、普通飲食加胰島素( I N S ) 和人絨毛膜促性腺激素( H C G ) 注射組( I N S + H C G 組) 及高脂飲食加I N S 和H C G 注射組( I N S + H C G + H F D組) 。通過觀察大鼠動情周期變化、卵巢外形及光鏡( H E 染色) 下病理學(xué)改變判斷造模是否成功。( 2 )

3、 測定空腹血糖( F B G ) 及空腹胰島素( F I N S ) 水平并計算穩(wěn)態(tài)模型法胰島素抵抗指數(shù)( H O M A ．瓜) ；測定性激素水平。( 3 ) 免疫組織化學(xué)法檢測G L U T - 4 在骨骼肌細(xì)胞的分布。( 4 ) 蛋白印記法( W e s t e r n B l o t ，W B ) 檢測大鼠骨骼肌細(xì)胞G L U T 4 、R S ．1 、p I R S 一1S —w 及I R S 一2 的表達(dá)。結(jié)果：( 1 )

4、動物模型的建立：I N S + H C G 處理組大鼠規(guī)律動情周期消失且卵巢外觀呈多囊樣改變，電鏡下卵巢體積增大，囊性卵泡數(shù)目增多，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少：非H C G + I N S 處理組大鼠仍有規(guī)律動情周期，電鏡下大鼠卵巢結(jié)構(gòu)正常，可見不同時期的卵泡和黃體，顆粒細(xì)胞層數(shù)多。( 2 ) 血清學(xué)檢測結(jié)果：與對照組相比，其余3 組F B G 水平?jīng)]有差異，但F I N S 水平、H O M A —I R 指數(shù)、血清睪酮( T ) 和黃體生成素

5、( L H ) 水平升高，尤其是玳S + H C G + H F D 組。( 3 ) 免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：除對照組外的其他3 組大鼠G L U T - 4 主要在骨骼肌細(xì)胞質(zhì)中分布，轉(zhuǎn)位至細(xì)胞膜的數(shù)量減少。( 4 ) W B 結(jié)果示：與對照組相比，大鼠骨骼肌組織總G L U T - 4 和I R S - 2 含量沒有明顯變化，但I(xiàn) R S ．1 表達(dá)量顯著下降，而p I R S ．1s W 0 7 蛋白含量卻明顯升高。結(jié)論：( 1 )

6、 I N S + H C G + H F D 成功誘導(dǎo)了較為理想的P C O S 胰島素抵抗大鼠模型。( 2 )多囊卵巢綜合征大鼠骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗的發(fā)生與胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受損密切相關(guān)，I R S ．1 表達(dá)下降及其絲氨酸3 0 7 位點(diǎn)磷酸化作用增加可能在P C O S 大鼠骨骼肌細(xì)胞R 的發(fā)生中起重要作用。關(guān)鍵詞：多囊卵巢綜合征；胰島素抵抗；骨骼?。黄咸烟寝D(zhuǎn)運(yùn)蛋白．4 ；胰島素受體底物A b s t r a c tO b j e

7、 c t i v e ：T oe s t a b l i s h a ni d e a la n i m a lm o d e l o f p o l y c y s t i co v a r ys 燦o m e ( P C O S ) c h a r a c t e r i z e d b ys k e l e t a lm u s c l ei n s u l i nr e s i s t a n c e ( 取) ；T oa n

8、a l y z et h ee x p r e s s i o n o ft h ep r o t e i n si n c l u d i n gg l u c o s et r a n s p o r t e r p r o t d n - 4 ( G L U T - 4 ) ，i n s u l i n r e c e p t o r s u b s t r a t e - 1 ( I R S - 1 ) ，I R S ．1 s

9、c r i n e 3 0 7p h o s p h o r y l a t i o n ( p I R S - 1S e 一7 、a n dI R S - 2 t h a ti n v o l v e i nt h ei n s u l i ns i g n a lt r a n s d u c t i o n p a t h w a y ．M e t h o d s ：( 1 ) E s t a b l i s h m e n to

10、 fP C O S - r a tm o d e l ：4 0f e m a l eS D r a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p s ：C o n t r o lg r o u p ，h i g h - f a td i e tg r o u p ( H F Dg r o u p ) ，n o r m a ld i e t1 ) l ，i t l l i

11、n s u l i n ( i N s ) a n d h u m a nc h o r i o n i cg o n a d o t r o p i n ( H C G ) i n j e c t i o n sg r o u p ( I N S + H C Gg r o u p ) a n d h i g h - f a t d i e tw i t l lI N S a n dH C G a d m i n i s t r a t

12、 i o n s g r o u p ( I N S + H C G + H F Dg r o u p ) ．T o e v a l u a t e w h e t h e r t h e m o d e l i n g w a ss u c c e s s f u lt h r o u g h o b s e r v i n gc h a n g e s o fe s t r o u s c y c l e ，s h a p ea n

13、 d p a t h o l o g i c a lc h a n g e s ( H Es t a i n i n g )o fo v a r i e s ．( 2 ) F a s t i n gb l o o dg l u c o s e ( F S G ) a n df a s t i n gi n s u l i n ( F I N S ) l e v e l sw e l “ ed e t e r m i n e da n d

14、h o m e o s t a s i s m o d e l a s s e s s m e n t o f i n s u l i n r e s i s t a n c e i n d e x ( H O M A - I R ) w e r e c a l c u l a t e d ；C o n c e n t r a t i o n so f 繃s e x h o r m o n e s w e r ed e t e c t

15、e d ；( 3 ) I m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o dw a s u s e d t os t u d y t h ed i s t r i b u t i o n so fG L U T ．4i ns k e l e t a lm u s c l ec e l l s ；( 4 ) P r o t e i nc o n t e n t s o fG L U T 珥，瓜S

16、一1 ，p I R S ．1s 0 0 7 a n d I R S - 2 w e r ed e t e c t e db y W e s t e r nB l o t ( w B ) ．R e s u l t s ：( 1 ) E s t a b l i s h m e n to f r a tm o d e l ：R a t s t r e a t e d 、j l ，i t h1 N S + H C G c e a s e de

17、s t r o u sc y c l e a n d g a i n e dc y s t i co v a r i e s ．T h es i z eo f o v a r i e sw e r e b i g g e r 、衍m m o r e f o l l i c u l a rc y s t sa n d l e s sl a y e r so f g r a n u l o s ec e l l su n d e r l i

18、 g h tm i c r o s c o p e ．H o w e v e r , t h eo t h e r r a t ss t i l le x h i b i t e de s f f O u sc y c l ea n d n o r m a lo v a r i a ns t r u c t u r e s ．L i g h tm i c r o s c o p e r e v e a l e df o l l i c

19、l e sa n d c o r p o r al u t e ai nv a r i o u ss t a g e sa n d m o r eg r a n u l o s ec e l l sl a y e r s ．( 2 ) P r o f i l e so f S C T U f f lh o r m o n e s ：C o m p a r e d 誦l hc o n t r o l ，t h eo t h e r3 g

20、r o u p sh a d s i m i l a rF B G l e v e l ，w h i l et h el e v e l so f F Ⅱq S ，H O M A - I R , t e s t o s t e r o n e ( ，I ’) a n dl u t e i n i z i n gh o r m o n e ( L H ) w e l “ es i g n i f i c a n t l yh i g h

21、e r , e s p e c i a l l y i nI N S + H C G + H F D g r o u p ．( 3 ) I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y r e s u l t s ：G L U T 一4i nt h e t h r e eg r o u p s ’s k e l e t a lm u s c l el o c a l i z e d p r e d o m

22、i n a n t l yi nc y t o p l a s m ，t h en u m b e r t r a n s l o c a t e dt ot h em e m b r a n eW a s l e s st h a nC o n t r o lg r o u p ．( 4 ) R e s u l t so f W B ：C o m p a r e d 誦t l l C o n t r o lg r o u p ，t o

23、 t a lG I ，I ?！?a n d Ⅱ0 ＆．2e x p r e s s i o n ss h o w e d n o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s w h i l e p r o t e i nc o n t e n to fI R S - 1w a so b v i o u s l y d e c r e a s e d a n d p I R S —ls e t 3

24、 0i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y ．C o n c l u s i o n s ：( 1 ) 玳s + H C G + H F D i n d u c e d a l l i d e a lP C O S - R r a t m o d e ls u c c e s s f u l l y ．( 2 ) T h e d a t as u g g e s t st h a tt h

25、 e o c c u r r e n c eo f Ⅱt o f P C O S i nr a ts k e l e t a lm u s c l e i s c l o s e l yr e l a t e d t oi m p a i r e di n s u l i ns i g n a l t r a n s d u c t i o n p a t h w a y , r e d u c t i o no fI R S - l

26、p r o t e i n c o n t e n ta n d i n c r e a s e o f i t s s e r i n e 3 0 7p h o s p h o r y l a t i o n a l li n v o l v e i nt h e p r o c e s s ．K e yw o r d s ：P o l y c y s t i co v a r y s y n d r o m e ；I n s u f