大豆斑疹病菌致病相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、大豆斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv.glycines，Xag)是大豆上的重要病原細(xì)菌，引起大豆斑疹病。磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase，Pgk)可逆地催化1，3-二磷酸甘油酸生成3-磷酸甘油醛。pgk突變顯著地削弱病原菌獲取蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖的能力，并完全阻斷丙酮酸的獲取;pgk突變減弱病原菌在大豆上的毒性與生長(zhǎng)能力，導(dǎo)致病原菌ATP產(chǎn)生及EPS合成明顯減少、并

2、顯著降低生物膜形成及細(xì)胞游動(dòng)性。功能互補(bǔ)能部分恢復(fù)上述表型至野生型水平;而全局性調(diào)控子Clp(cAMP-like protein)對(duì)上述表型并無(wú)恢復(fù)能力。此外，qRT-PCR結(jié)果顯示:pgk受上述六種糖的顯著誘導(dǎo)表達(dá)，相對(duì)于無(wú)糖條件下，誘導(dǎo)表達(dá)量達(dá)10倍以上。clp突變顯著地減弱病原菌的EPS合成、生物膜形成、細(xì)胞游動(dòng)性以及在寄主大豆上的毒性與生長(zhǎng)能力;過(guò)表達(dá)clp同樣明顯地降低病原菌的EPS合成及生物膜形成，但能超量互補(bǔ)病原菌的細(xì)胞游

3、動(dòng)性。酶活測(cè)定實(shí)驗(yàn)揭示，Clp對(duì)Xag纖維素酶、內(nèi)切甘露聚糖酶及淀粉酶活性具有正調(diào)控作用，而對(duì)蛋白酶活性具有正負(fù)調(diào)控作用。qRT-PCR結(jié)果表明:clp突變顯著地抑制gum基因簇的表達(dá)，而clp過(guò)表達(dá)明顯抑制gumB、gumC的表達(dá);Rpf及HrpX/HrpG級(jí)聯(lián)均正調(diào)控clp的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。此外，本研究還新發(fā)現(xiàn)Clp對(duì)Xag獲取碳源能力具有正負(fù)調(diào)控作用，clp缺失具有延遲并削弱病原菌激發(fā)HR的能力。以上證據(jù)表明，Pgk和Clp是Xag的毒