SOCS1拮抗劑(pJAK2多肽)修飾的DC誘導特異性抗胃癌效應(yīng)的初步實驗研究.pdf

1、目的:探討細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制分子-1(suppressor of cytokine signaling-1，SOCS1)拮抗劑(pJAK2多肽)修飾的樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)的體外制備和特異性抗胃癌效應(yīng)。
　　方法:采集健康人外周血，密度梯度離心法獲得外周血單個核細胞(PBMCs)，用rhGM-CSF及rhIL-4誘導分化DCs，每3日換液一次，并補充等量的細胞因子。第5天分為對照組、抗原負載組、多肽

2、修飾組，抗原和多肽作用4h后，加入rhTNF-α和LPS作用24h促成熟，最后收獲細胞進行實驗。倒置相差顯微鏡下每日觀察DCs形態(tài);FCM檢測進行DCs表型鑒定;MTT比色法分析各成熟DCs刺激自體T細胞增殖能力;LDH細胞毒試驗檢測CTLs對胃癌細胞的殺傷活性;ELISA法測定IL-12、IFN-γ水平。
　　結(jié)果:各組均成功誘導出成熟DCs，倒置顯微鏡下觀察具有DCs的典型形態(tài)學變化。當抗原濃度為0.1 mg/mL時，各表型表

3、達水平與mDC組比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。各濃度pJAK2多肽修飾的DCs的CD83、CD80、CD86及HLA-DR的表達水平均明顯高于mDC組（P＜0.01），且當pJAK2多肽的濃度為30μM時，各免疫表型分子的表達水平最高?；旌狭馨图毎磻?yīng)中刺激細胞和反應(yīng)細胞按不同比例共培養(yǎng)96 h，當成熟DCs與自體T細胞比值為1∶10時增殖能力最強。LDH細胞毒試驗結(jié)果提示在5∶1～20∶1的效靶比范圍內(nèi)，其殺傷作用與效靶比呈正相

4、關(guān);當效靶比為20∶1時，Ly+p-30μM組的殺傷率為(40.42±3.13)％，明顯高于Ly-0.1 mg/mL組(P＜0.01)。DCs受rhTNF-α和LPS刺激后，IL-12的分泌水平較前明顯上升;當pJAK2多肽為30μM時，IL-12的分泌水平為(426.44±28.89)pg/mL明顯高于Ly-0.1mg/mL組（P＜0.01）。Ly+p-30μM組IFN-γ的分泌水平顯著高于Ly-0.1 mg/mL組(P＜0.01）。