非b細(xì)胞來源igκ保守序列特異性抗體應(yīng)用的初步研究與ecdi交聯(lián)的人脾淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)供者特異性耐受的實(shí)驗(yàn)體系初步建立(1)

1、南方醫(yī)科大學(xué)2013級(jí)碩士學(xué)位論文非B細(xì)胞來源IgKt呆：守序列特異性抗體應(yīng)用的初步研究與ECDI交聯(lián)的人脾淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)供者特異性耐受的實(shí)驗(yàn)體系初步建立課題來源：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部合作課題廣東省自然科學(xué)基金1414050000059專業(yè)名稱免疫學(xué)學(xué)位申請(qǐng)人楊沙指導(dǎo)教師劉艷君副教授答辯委員會(huì)主席吳玉章教授答辯委員會(huì)成員吳長有教授徐軍發(fā)教授黎誠耀教授陳政良教授論文評(píng)閱人劉北一副教授向軍儉教授2016年5月17號(hào)廣州摘要排組合以及連接與抗原刺激后

2、誘發(fā)的B淋巴細(xì)胞高頻突變。傳統(tǒng)免疫學(xué)理論認(rèn)為，Ig只在B淋巴細(xì)胞發(fā)育過程中選擇性重排。邱曉彥教授課題組研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌、肺癌、卵巢癌、腸癌、胃癌、鼻咽癌、胰腺癌等上皮來源腫瘤細(xì)胞及部分正常上皮細(xì)胞內(nèi)Ig存在功能性基因重排。不同類型的腫瘤細(xì)胞表達(dá)完全相同的可變區(qū)序列，同一個(gè)體以及不同個(gè)體腫瘤細(xì)胞來源的Ig序列表達(dá)高度同源，研究發(fā)現(xiàn)在B細(xì)胞表達(dá)的Ig數(shù)據(jù)庫均未發(fā)現(xiàn)這些序列，提示Ig為非B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，來源于腫瘤細(xì)胞。腫瘤來源的Ig基因轉(zhuǎn)錄本具

3、有獨(dú)特基因結(jié)構(gòu)，在不同類型的腫瘤細(xì)胞，尤其是輕鏈在所有檢測病例均表達(dá)極為相似的重排模式(個(gè)別堿基的替換)或同一結(jié)構(gòu)保守序列，即VK41Jr3型Ig轉(zhuǎn)錄本(e4利申請(qǐng)?zhí)枮?005101078339)?？紤]到VK41JK3型Igs最初發(fā)現(xiàn)于腫瘤，因此可能成為腫瘤研究、診斷乃至治療的靶點(diǎn)，關(guān)鍵在于獲得針對(duì)VK41Jr3結(jié)構(gòu)特異性抗體。作為與北京大學(xué)邱曉彥教授的合作課題，課題組前期利用生物信息學(xué)方法分析預(yù)測了VK41Jr3型Ig兩個(gè)特異性的B細(xì)

4、胞識(shí)別表位，設(shè)計(jì)合成三個(gè)短肽，分別為QF20(QAEDVAVYYCQQYYDTPVTF)，ALl3(序列ASINCKSSQRVSL)，AL13B(TQSPDSLVVSLGERASINCKSSQRVSLG，即ALl3的延長序列)，并獲贈(zèng)邱曉彥教授課題組提供的原核表達(dá)VK41J1c3型Ig融合蛋白(GSTVK41Jr3)。以合成肽ALl3BKLH、原核蛋白GSTVK41Jr3免疫小鼠獲得系列單克隆抗體。獲得的抗Vr41Jr3型Ig特異性表位

5、抗體，為研究非B淋巴細(xì)胞、組織液以及血液中可溶性Vr41一Jr3型Ig表達(dá)提供強(qiáng)有效工具。本項(xiàng)研究主要目的是對(duì)抗VK41Jr3型Ig特異性表位單抗的鑒定以及建立雙單抗夾心ELISA檢測體系及其應(yīng)用。我們用ELISA鑒定抗體的特異性，這部分工作主要是在課題組前期抗VK41JK3型Ig單抗制備工作的繼續(xù)。VK41Jr3型Ig最早發(fā)現(xiàn)于上皮來源腫瘤細(xì)胞，擬建立雙單抗夾心ELISA檢測體系，檢測可溶性(分泌型)VK：41Jr3型IgK，觀察正常