食管癌患者外周血樹突狀細(xì)胞的測定及臨床價值探索.pdf

1、目的: 現(xiàn)代免疫學(xué)已滲入到從腫瘤的發(fā)生到發(fā)展，從診斷到治療的各個階段、環(huán)節(jié)中，機(jī)體免疫功能低下對突變細(xì)胞的監(jiān)視和殺傷清除能力降低，則會導(dǎo)致腫瘤的生發(fā)。在臨床中尋找一種簡單、快捷、敏感、可靠的指標(biāo)來幫助了解人體免疫功能狀態(tài)，以此來指導(dǎo)治療、監(jiān)視病情變化、判斷預(yù)后尤為重要。樹突狀細(xì)胞(DC)是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，尤其因能激活初始型T細(xì)胞被稱為免疫應(yīng)答的啟動者，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮著舉足輕重的獨特作用，成為其它專職抗原提呈細(xì)

2、胞所不可替代的角色。因此，腫瘤患者外周血DC有望成為標(biāo)示免疫功能狀態(tài)指標(biāo)的最佳選擇。同時由于DC中CD1a發(fā)育途徑的亞群特異性地分布于表皮和粘膜的上皮組織中因此其變化可能與食管癌發(fā)生、發(fā)展有著密切的免疫、組織學(xué)聯(lián)系。本實驗的目的就是通過比較外周血DC亞群在食管癌患者與正常人差異以及不同分期、不同階段患者之間變化以探索其在食管癌患者診治及預(yù)后中的臨床意義。 方法: 1.對所選擇樹突狀細(xì)胞亞群進(jìn)行鑒定 首先通過包被單

3、克隆抗體免疫磁珠法對單核細(xì)胞群中CD14-CD11c+、CD14+CD11c+、CD14-CD11c-細(xì)胞群進(jìn)行分選培養(yǎng)后并光學(xué)顯微鏡下和電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀對其表型進(jìn)行鑒定，并作為刺激細(xì)胞與正常人的T淋巴進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。并設(shè)培養(yǎng)液為陰性實驗對照比較其刺激淋巴細(xì)胞增殖情況。 2.外周血樹突狀細(xì)胞的流式細(xì)胞儀檢測及臨床分析 采用流式細(xì)胞儀側(cè)向散射(ss)和前向散射(fs)技術(shù)與熒光標(biāo)記單克隆抗體檢測相

4、結(jié)合的方法對55例食管癌患者(未輸血組TNM分期I、IIa、IIb、Ⅲ期各10例，輸血組Ⅲ期15例)、20例正常人外周血中的DC進(jìn)行亞群、分化階段的分類計數(shù)和分析。同時對所有實驗人群外周血T淋巴細(xì)胞亞群也進(jìn)行了監(jiān)測以便對比和參考。首先分別以t檢驗、logistic回歸統(tǒng)計學(xué)方法分析外周血DC亞群與食管癌發(fā)病的關(guān)聯(lián)，單因素方差分析探索TNM分期與外周血DC亞群關(guān)系，其次的通過COX回歸分析外周血DC、MDC/DC、TH、TH/TS、TNM

5、五個因素在食管癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的改變。 3.臨床應(yīng)用 通過兩樣本t檢驗比較Ⅲ期輸血組與未輸血組于術(shù)前、術(shù)后2天、術(shù)后7天外周血DC、MDC/DC變化，配對t檢驗統(tǒng)計分析每組手術(shù)前后DC亞群變化，并一步比較兩組人群術(shù)后一年內(nèi)轉(zhuǎn)移率。 結(jié)果: 1.三群細(xì)胞所需培養(yǎng)條件不同，光學(xué)倒置顯微鏡、電子顯微鏡下觀察都外周長滿樹突狀突起符合樹突狀細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征，而又有各自特點，唯有LC-type DC中可見LC特征性標(biāo)記Bi

6、rbeck顆粒。表型鑒定提示CD80、CD86共刺激分子最先豐富表達(dá)的是LC-type DC并且在無任何細(xì)胞因子過夜培養(yǎng)后就有高度表達(dá)。在比較三種DC成熟狀態(tài)下激活T細(xì)胞增殖強(qiáng)度上LC-type DC>MO-DC>LY-DC同時發(fā)現(xiàn)除LC-type DC外其他兩群DC尤其LY-DC發(fā)育具有很強(qiáng)的刺激因子依賴性。 2.食管癌患者外周血DC、Mdc/DC比值都明顯低于正常人，不同TNM分期外周血DC亞群計數(shù)、比例都具有明顯差異。單因

7、素分析中顯示了外周血DC、MDC/DC、TH、TH/TS、TNM五個因素在食管癌術(shù)后轉(zhuǎn)移中存在明顯差別，而性別、年齡組間無明顯差異。多因素的COX回歸分析中僅DC、MDC/DC3、TNM三種因素進(jìn)入模型前兩者與食管癌轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，后者呈正相關(guān)。DC、MDC/DC與TH、TH/TS之間有明顯相關(guān)性。 3.T檢驗提示輸血組手術(shù)后7天外周血DC、Mdc/DC與未輸血組存在明顯差別，其一年內(nèi)轉(zhuǎn)移率也明顯高于未輸血組。 結(jié)論:

8、 通過形態(tài)學(xué)觀察、表型鑒定和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)證實所查細(xì)胞群確為樹突狀細(xì)胞亞群。其中郎各罕斯細(xì)胞來源的DC是外周血中的主流抗原提呈功能細(xì)胞。實驗結(jié)果顯示食管癌患者外周血中DC亞群明顯低于正常人群，并且可通過流式細(xì)胞儀測定CD14-CD11c+熒光標(biāo)記的方法動態(tài)觀察。腫瘤對機(jī)體免疫功能的抑制可表現(xiàn)為外周血中DC亞群含量隨著食管癌TNM期的增加而減少。食管癌患者外周血DC亞群所表現(xiàn)的免疫狀況可做為預(yù)示術(shù)后轉(zhuǎn)移風(fēng)險的獨立因子，并在一定程度上