PegIFNα治療慢乙肝用藥指導(dǎo)指標(biāo)的篩選及NK細(xì)胞在慢性乙肝病毒感染中作用的初步探索.pdf

1、本文針對聚乙二醇干擾素治療慢乙肝用藥指導(dǎo)指標(biāo)篩選及NK細(xì)胞在慢性乙型肝炎感染過程中的作用兩個(gè)問題進(jìn)行探討，共由兩部分研究組成。
　　其中第一部分旨在篩選能夠指導(dǎo)聚乙二醇干擾素治療慢性乙型肝炎用藥的指標(biāo)。乙型肝炎病毒(HBV)感染是我國乃至全世界最重要的公共衛(wèi)生問題之一，嚴(yán)重威脅人類健康。目前用于乙肝病毒感染的治療藥物主要有兩類:干擾素(普通干擾素(IFNα)和聚乙二醇干擾素(PegIFNα))和核酸類似物(拉米夫定(Lamivud

2、ine，LAM)、替比夫定(Telbivudine，LdT)等）。兩類藥物中因干擾素具有直接抗病毒和免疫調(diào)節(jié)雙重作用，所以臨床抗病毒治療中應(yīng)用較為廣泛，其具有無耐藥、有免疫介導(dǎo)的控制HBV感染的潛在作用的優(yōu)點(diǎn)，從而使治療結(jié)束時(shí)患者有機(jī)會(huì)得到較高的HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換、更持久的病毒學(xué)應(yīng)答以及HBsAg清除，使這些患者可維持HBVDNA在檢測下限。然而使用干擾素α常規(guī)治療6個(gè)月治療的效應(yīng)率為25％-40％，復(fù)發(fā)率和停藥后的后續(xù)效應(yīng)率均約為1

3、5％～20％，持續(xù)效應(yīng)率也僅為25％～40％。治療效應(yīng)有很大的個(gè)體差異，30％以上的病例需要6個(gè)月以上的治療。另外從治療費(fèi)用上看，干擾素α與其他藥物有很大區(qū)別，治療1年的大致費(fèi)用PegIFNα-2a/2b遠(yuǎn)高于LAM、ADV和ETV等藥物。如慢乙肝患者使用干擾素α進(jìn)行6個(gè)月以上乃至24月的抗病毒治療，治療失敗不僅給患者帶來身體和精神上痛苦，而且要承受巨大的經(jīng)濟(jì)壓力?，F(xiàn)在雖然有一些指標(biāo)用于干擾素α應(yīng)答的預(yù)測，但并不能滿足臨床需要。有鑒于此

4、，本研究首先通過收集聚乙二醇干擾素治療前及治療后24周的慢性乙肝患者的血清樣本，以病毒學(xué)應(yīng)答和非病毒學(xué)應(yīng)答進(jìn)行分組，使用luminex200檢測46種人細(xì)胞因子，所有細(xì)胞因子中CXCL9和IP-10基線水平病毒學(xué)應(yīng)答組高于非應(yīng)答組，應(yīng)答組在治療過程中下降然而非應(yīng)答組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MIP-1d在病毒學(xué)應(yīng)答組基線水平和治療過程中均顯著高于非應(yīng)答組，而TARC則在毒學(xué)應(yīng)答組基線水平和治療過程中均顯著低于于非應(yīng)答組。基線水平HBVDNA、H

5、BeAg、TARC、MIP1d、CXCL9、CXCL6和IP10具有較好的干擾素治療病毒學(xué)應(yīng)答的預(yù)測效果，其受試者工作特征曲線顯示線下面積分別為0.879、0.964、0.77、0.787、0.799、0.722和0.787(p=0.001、p＜0.001、p=0.021、p=0.01、p=0.01、p=0.05和p=0.013)。另外CXCL9、CXCL6與ALT具有顯著相關(guān)性(r=0.588、p=0.002;r=0.530、p=0.

6、005)。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)在慢性乙型肝炎治療前及治療過程中細(xì)胞因子的水平對干擾素治療慢性乙肝的病毒學(xué)應(yīng)答具有預(yù)測效果，可作為慢性乙肝治療前選擇用藥的指標(biāo)。
　　第二部分旨在初步探索NK細(xì)胞在慢性乙肝病毒感染過程中對機(jī)體抗病毒免疫反應(yīng)的影響機(jī)制。慢性HBV感染患者機(jī)體缺乏有效的抗病毒免疫反應(yīng)，宿主無法及時(shí)有效清除體內(nèi)病毒，致使病毒持續(xù)感染。這種免疫耐受狀態(tài)可能是由于宿主抗HBV的細(xì)胞免疫應(yīng)答處于無能或被抑制狀態(tài)造成的。新近研究發(fā)

7、現(xiàn)慢性病毒感染者免疫耐受狀態(tài)的形成可能與NK細(xì)胞活化后抑制T細(xì)胞反應(yīng)密切相關(guān)，NK細(xì)胞通過不同途徑限制T細(xì)胞功能，包括NK細(xì)胞通過影響抗原遞呈影響T細(xì)胞功能,NK細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子改變T細(xì)胞反應(yīng)，或通過NK的裂解作用調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫反應(yīng)等。通過阻斷NK活性或直接刪除NK細(xì)胞可能恢復(fù)病毒特異性T細(xì)胞活性，逆轉(zhuǎn)免疫耐受，激活宿主抗病毒免疫應(yīng)答以促進(jìn)HBV的清除，可能是治療慢乙肝藥物的研究方向之一。本研究從在體和體外實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面去初步探索NK

8、細(xì)胞在慢乙肝中的作用機(jī)制。在體實(shí)驗(yàn)中，我們利用HBV轉(zhuǎn)基因小鼠為模型，使用Anti-NK1.1單抗阻斷NK細(xì)胞活性，結(jié)果顯示阻斷NK細(xì)胞活性后可使HBV轉(zhuǎn)基因小鼠血清HBVDNA和HBsAg水平發(fā)生顯著降低，在阻斷后的第三天效果最為顯著，HBVDNA較治療前下降約1.5log10，HBsAg較治療前下降約1.0log10。體外實(shí)驗(yàn)中，提取慢乙肝患者PBMC后分選刪除NK后使用核心抗原多肽與PBMC及刪除NK細(xì)胞的PBMC共培養(yǎng)，結(jié)果顯示