Toll樣受體3在乙肝病毒致bewo細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的: ①探索乙肝病毒能否在bewo細胞中復(fù)制，建立對乙肝病毒易感的細胞模型； ②探索乙肝病毒能否能使得bewo發(fā)生凋亡； ③探索TLR3是否在乙肝病毒致bewo細胞凋亡中起作用。 方法: ①bewo細胞與HBVDNA含量為5.0×106(copies/ml)的血清共培養(yǎng)后，PCR檢測細胞中HBVcccDNA的表達情況； ②通過流式細胞技術(shù)、TUNEL法檢測細胞的凋亡情況，探討能夠使得be

2、wo細胞發(fā)生凋亡的HBVDNA的劑量、作用時間； ③觀察PolyⅠ：C刺激對與HBVDNA陽性血清共培養(yǎng)的bewo細胞凋亡的影響，同時流式細胞技術(shù)檢測TLR3蛋白的改變，推測TLR3在乙肝病毒致bewo細胞凋亡中所起的作用。 結(jié)果: ①與HBVDNA陽性血清共培養(yǎng)48小時后，PBS反復(fù)洗滌，繼續(xù)生長24h、48h后bewo細胞中能夠檢測出HBVcccDNA； ②bewo細胞與50μlHBVDNA含量為5.

3、0×106(copies/ml)的血清共培養(yǎng)8h、24h、48h，早期凋亡率分別為4.34±3.42％、1.98±1.42％、6.58±3.44％，總凋亡率分別為10.78±5.36％、7.21±2.39％、16.35±9.61％，與同期對照組比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義，P值均大于0.05； ③bewo細胞與100μlHBVDNA含量為5.0×106(copies/ml)血清的共培養(yǎng)8h，早期凋亡率為5.55±1.80％，總凋亡率為1

4、0.88±2.33％，與對照組比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.064、P=0.997)。與100μlHBVDNA含量為5.0×106(copies/ml)血清共培養(yǎng)24h、48h后，bewo細胞早期凋亡率分別為20.76±2.13％、24.23±6.87％，總凋亡率分別為25.58±2.11％、30.95±9.02％，凋亡指數(shù)分別為27.17±1.22％、30.47±1.92％，與對照組比較差別均有統(tǒng)計學(xué)意義，P值均小于0.001。

5、 ④PolyI：C刺激后再與HBVDNA陽性血清共培養(yǎng)24h、48h，bewo細胞早期凋亡率分別為6.28±3.70％、6.25±1.35％，總凋亡率分別為7.69±3.71％、6.67±1.54％，均低于HBVDNA陽性血清直接刺激組，t檢驗差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均小于0.05)； ⑤PolyⅠ：C刺激組bewo細胞TLR3蛋白平均熒光強度為36.0217±2.71701，對照組細胞為32.5852±1.40918，差別有統(tǒng)

6、計學(xué)意義(P=0.02)。 結(jié)論: ①乙肝病毒能夠在bewo細胞中復(fù)制，bewo細胞適合進行體外乙肝病毒感染試驗； ②乙肝病毒能夠使得bewo細胞發(fā)生凋亡，上調(diào)TLR3的表達，TLR3可能參與了乙肝病毒致bewo細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)； ③PolyⅠ：C刺激后上調(diào)了TLR3蛋白的表達，降低了與HBVDNA陽性血清共培養(yǎng)的bewo細胞的凋亡率。PolyⅠ：C對TLR3的活化可能增強bewo細胞的抗病毒能力，減少