深入研究RIG-G抑制腫瘤細(xì)胞增殖的分子機(jī)制.pdf

1、RIG-G（retinoic acid-induced gene G）是從急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋcute Promyelocytic Leukemia，APL）細(xì)胞系NB4中克隆得到的一個(gè)可被維甲酸誘導(dǎo)表達(dá)的基因。該基因位于10q24，其cDNA全長(zhǎng)1919bp，編碼的蛋白分子量約60kD。研究表明，除NB4細(xì)胞外，在多種腫瘤細(xì)胞（包括白血病細(xì)胞和實(shí)體瘤細(xì)胞）中，RIG-G基因都可以被維甲酸和/或干擾素顯著地誘導(dǎo)表達(dá)。有關(guān)RIG-G基

2、因功能的研究表明，RIG-G可以通過(guò)上調(diào)細(xì)胞內(nèi)p27和p21蛋白的水平來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
　　 在以前的工作中，我們?cè)l(fā)現(xiàn)RIG-G可以與JAB1蛋白發(fā)生相互作用，并將后者阻滯在細(xì)胞漿中，無(wú)法正常攜帶磷酸化的p27蛋白出核，從而抑制了p27蛋白通過(guò)胞漿的泛素/蛋白酶體系統(tǒng)降解。近年來(lái)的研究顯示，JAB1是COP9信號(hào)體（COP9 signalosome，CSN）復(fù)合物的一個(gè)亞基，也被稱為CSN5。CSN是一個(gè)多亞基復(fù)合物，在哺

3、乳動(dòng)物細(xì)胞中由9個(gè)亞基組成，主要存在于細(xì)胞核中。CSN復(fù)合物具有多種功能，可在胚胎發(fā)育、細(xì)胞周期調(diào)控、血管生成以及維持微環(huán)境穩(wěn)態(tài)等多種生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，CSN復(fù)合物可以調(diào)控一類含cullin和RING蛋白的E3泛素連接酶復(fù)合物（cullin-RING-ligases，CRLs）的活性和穩(wěn)定性，并繼而影響細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的泛素化。在CRLs-E3連接酶所識(shí)別的靶蛋白中包含一些與細(xì)胞周期密切相關(guān)的調(diào)控因子如p27、p21、cy

4、clinD等，這些蛋白的泛素化對(duì)于保證細(xì)胞周期的正常進(jìn)行至關(guān)重要。細(xì)胞中的CSN復(fù)合物一旦發(fā)生異常即會(huì)引起細(xì)胞周期紊亂，最終導(dǎo)致疾病包括腫瘤的發(fā)生。由于RIG-G可以影響JAB1/CSN5在細(xì)胞內(nèi)的分布和功能，那么，RIG-G是否也會(huì)影響CSN復(fù)合物的功能呢？本課題通過(guò)研究RIG-G對(duì)CSN復(fù)合物組成以及功能的影響，對(duì)RIG-G如何調(diào)控p27和p21蛋白、抑制細(xì)胞增殖的分子機(jī)制進(jìn)行了深入的探討。
　　 我們以可誘導(dǎo)表達(dá)RIG-G

5、的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株U937T-RIG-G及其對(duì)照細(xì)胞U937T-pTRE為研究對(duì)象，通過(guò)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳、凝膠過(guò)濾層析等實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)RIG-G可以改變 CSN復(fù)合物的組成。進(jìn)一步利用Western blot、RT-PCR、蛋白降解抑制和合成抑制等試驗(yàn)，我們又發(fā)現(xiàn) RIG-G可以使CRL-E3連接酶中的亞基cullin1以及Skp2的蛋白水平下降，表明RIG-G的確可以通過(guò)改變CSN復(fù)合物的組成影響其功能。CRL-E3連接酶的穩(wěn)定性下降，

6、會(huì)直接使p27蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的泛素化受到抑制，導(dǎo)致其無(wú)法降解而在細(xì)胞內(nèi)累積。
　　 此外，我們發(fā)現(xiàn) RIG-G還可以抑制c-Jun蛋白的磷酸化。C-Jun蛋白磷酸化水平的降低會(huì)抑制 c-myc基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而促進(jìn)p21基因的表達(dá)。RIG-G的這種抑制作用很可能也是因?yàn)镃SN復(fù)合物水平的下降引起的。
　　 總之，本課題在原有工作基礎(chǔ)上深入研究了RIG-G對(duì)CSN復(fù)合物組成和功能的影響，進(jìn)一步闡明了RIG-G上調(diào)p27和p2