頸源性頭頸痛的神經機制研究.pdf

1、第一部分頸部交感一感覺神經藕聯的形態(tài)學觀察及其在頸源性疼痛中的作用機制研究
　　 實驗一
　　 目的：頭頸痛臨床上很常見，明確分布于頸部組織結構包括硬膜、后縱韌帶、小關節(jié)囊和椎動脈的神經支配和神經遞質的化學狀況，對于預防和治療頭頸痛有重要的意義。
　　 方法：SD大鼠24 只，隨機分為A、B 二組，每組12 只，A組行頸交感神經切除術，B組假手術，兩組大鼠存活一天后，再次麻醉、灌注，取C3-C5 脊髓段硬膜包括D

2、RG、椎管前后壁軟組織層包括后縱韌帶、小關節(jié)囊、椎動脈等標本，采用二步Envision 法進行SP(P 物質)和TH(酪氨酸羥化酶)免疫組化染色，光鏡下觀察SP 免疫反應(SP-IR)纖維和TH 免疫反應(TH-IR)纖維，測量各區(qū)免疫反應纖維陽性區(qū)域面積。
　　 結果：硬膜、后縱韌帶、小關節(jié)囊和椎動脈壁均有SP-IR和TH-IR 陽性纖維分布，其中硬膜陽性纖維主要分布于根袖區(qū)和腹側區(qū)，后縱韌帶陽性纖維主要分布于椎間部，椎動脈壁

3、外膜外、外膜層和中膜層以TH-IR 纖維為主，頸交感神經切除后各結構TH-IR 纖維均顯著減少(P＜0.01)。
　　 結論：頸椎周圍的組織結構中有肽類遞質SP和經典遞質NE 共存，表明這些結構和頸源性疼痛癥狀有關，交感神經系統(tǒng)可能在周圍神經初級感覺信息的調制中有重要的意義；硬膜根袖區(qū)SP 反應纖維密度較高，如受到刺激，可能較早出現向上肢的放散性疼痛；椎動脈表面及及中膜肌層有致密的交感神經分布,如有壓迫、炎癥等因素,可能引起椎動

4、脈的痙攣并出現椎基底動脈系統(tǒng)血流障礙(VBI)。
　　 實驗二
　　 目的：探討頸部脊神經節(jié)(DRG)和交感神經節(jié)(SG)內腎上腺素(NA)能神經和肽能神經的分布，脊神經節(jié)內NA 能纖維的起源以及脊神經節(jié)和交感神經節(jié)在疼痛調控中的關系。
　　 方法：SD大鼠36 只，隨機分為A、B、C、D、E、F 六組，每組6 只，進行如下操作：A組動物灌注、固定后取C3-C5 段DRG 及同側交感頸上神經節(jié)，進行SP和TH 免

5、疫組化染色，觀察免疫反應纖維在DRG和SG 中分布；B組動物應用HRP神經順行追蹤法，C組動物應用Bb 神經逆行追蹤法觀察DRG和SG的神經纖維聯系，D組作為對照；E組動物切除交感神經節(jié)及交感干后測定雙上肢50[％]機械縮腿閾值，F組作為對照。
　　 結果：頸脊神經節(jié)中有大量的SP 陽性胞體和纖維，無ＴＨ陽性細胞，但有一些TH 陽性纖維和終末；交感頸上節(jié)中ＴＨ陽性胞體和纖維大量存在，環(huán)繞著節(jié)細胞及其衛(wèi)星細胞，無SP 陽性胞體，但

6、有陽性纖維和終末不均勻地分布；交感頸上節(jié)內注射ＨＲＰ后，可在同側Ｃ1-Ｃ8 段脊神經節(jié)觀察到標記細胞，脊神經節(jié)內注射Ｂb 后，可在同側交感頸上節(jié)內觀察到Ｂb 標記神經元胞體；交感神經切除后上肢50[％]縮腿閾值二周達到穩(wěn)定，與對照組相比閾值顯著升高(P<0.05)。
　　 結論：交感節(jié)后纖維可直接到達DRG 并與節(jié)細胞發(fā)生接觸，通過作用于DRG 胞體來調節(jié)初級感覺信息的傳入；另外SG 內的SP 纖維來自于DRG 初級傳入神經元的

7、軸突，提示DRG和SG 神經元在中樞外存在反射調節(jié)機制；交感神經切除提高了大鼠痛閾，使其痛覺敏感性降低。
　　 第二部分頸椎小關節(jié)在頸源性頭頸痛中的作用及其機制
　　 實驗一
　　 目的：研究頸椎小關節(jié)的神經支配來源及其通路，為闡明小關節(jié)損傷后彌漫性頭頸肩部疼痛的機制及其治療提供依據。
　　 方法：39 只SD 雄性大鼠，分為頸交感神經未切除組(A組，18 只)、切除組(B組，18 只)及對照組(C組，3

8、 只)，A、B組分別于C1-2、C3-4和C5-6小關節(jié)囊注射5[％]雙苯甲亞胺(Bb)0.6μl，C組注射等量生理鹽水。8h后檢查各組C1-C8 脊神經節(jié)(DRG)和交感神經節(jié)(SG)的熒光標記細胞，并作統(tǒng)計學分析。
　　 結果：A組脊神經節(jié)和交感神經節(jié)內均可見到熒光標記細胞，其中，C1-2和C3-4關節(jié)囊內注射組C1-C8 DRG 內有Bb(+)細胞，C5-6 關節(jié)囊內注射組的C3-C8 DRG 內可見Bb(+)細胞，B組注

9、射節(jié)段和相鄰節(jié)段Bb(+)細胞無明顯減少，但遠節(jié)段的Bb(+)細胞明顯減少；C組未見Bb(+)細胞。
　　 結論：頸椎小關節(jié)囊神經支配來源于感覺和交感神經系統(tǒng)，脊神經節(jié)和交感神經節(jié)間有神經纖維聯系，阻斷脊神經和交感神經在臨床上有可能緩解患者的頭頸肩痛癥狀。
　　 實驗二
　　 目的：三叉神經節(jié)和上位頸脊髓后根在解剖和功能上有密切的聯系，本實驗觀察了三叉神經節(jié)(TG)中P 物質(SP)免疫反應物的分布，并探討C1-

10、3小關節(jié)和三叉神經節(jié)(TG)間的神經纖維聯系及其在頸源性頭痛(CeH)中的外周作用機制。
　　 方法：40 只SD 雄性大鼠，隨機分為5組，前4組分別于C1-2、C2-3、C3-4、C4-5 單側小關節(jié)囊注射5[％]雙苯甲亞胺(Bb)0.6μl，8小時后檢查TG 熒光標記細胞，第5組觀察TG 中P 物質(SP)免疫反應物的分布。結果作統(tǒng)計學分析。
　　 結果：C1-2、C2-3、C3-4組TG 中可見到熒光標記細胞，其中

11、C3-4組熒光標記細胞明顯減少，C4-5組未見熒光標記細胞；TG 中SP 免疫陽性細胞不均勻地分布于周圍突中，熒光標記細胞和SP 免疫陽性細胞均以中小型細胞為主，發(fā)出細的薄髓和無髓纖維。
　　 結論：C1-3小關節(jié)有來源于TG 中樞突的側支或周圍突的SP 神經纖維分布，寰枕、寰樞或C2-3小關節(jié)的不穩(wěn)定或病變可引起枕頸部的疼痛和三叉神經支配區(qū)的疼痛，此種疼痛不同于中樞匯聚機制所導致的牽涉痛，表明CeH 存在中樞外的反射機制。

12、r>　　 第三部分SNL大鼠外周神經節(jié)NPY及其受體的基因表達和意義
　　 目的：NPY 及其受體在調控軀體感覺傷害性信息中發(fā)揮著重要的作用，周圍神經損傷后，NPY 及其受體mRNA在脊神經節(jié)的表達發(fā)生可塑性變化，然而頸神經損傷后DRG中神經肽與其受體之間的確切關系仍不清楚，本研究在大鼠頸神經根性痛模型中觀察了DRG 中NPY、Y1R和Y2R的表型變化，以期能闡明神經病理性痛的外周發(fā)病機制，為未來新藥的開發(fā)提供靶點。
　

13、　 方法：制作大鼠頸神經病理痛模型(SNL 模型)，手術組、假手術組和正常對照組動物分別于術后7d、14d 灌注后取左側C5和C6 脊髓背根神經節(jié)，應用免疫熒光染色、聚合酶鏈反應和Western 印記分析技術檢測了SNL大鼠不同時間點DRG 中NPY、Y1R和Y2R基因和蛋白的表達變化。
　　 結果：假手術組和對照組DRG 中無NPY 免疫反應陽性細胞和神經纖維顯示，神經損傷后，DRG內出現NPY 陽性細胞，主要位于小型細胞；

14、假手術組和對照組DRG 中可見Y1R和Y2R 紅色熒光標記，神經損傷后，Y1R和Y2R 表達增強，其中Y1R 主要見于小型細胞，Y2R 主要見于大型細胞。NPY和Y1R、Y2R 雙標神經元主要是大細胞。假手術組和對照組DRG 中不表達或極低水平表達NPY mRNA和蛋白，但可見Y1R和Y2R的表達，它們傷后表達水平均顯著上調(P<0.01)。
　　 結論：Y1R和Y2R在調節(jié)痛敏中有重要作用，NPY 參與抗傷害作用是通過其受體完