假蕈狀芽孢桿菌B-60菌株纖溶酶的分離純化與性質(zhì)分析.pdf

1、血栓栓塞性疾?。╰hrombotic disease，TD）發(fā)病率、致殘率、致死率皆高，已成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一。藥物溶栓是目前臨床應(yīng)用最廣泛、最有效的治療手段。迄今為止，溶栓劑已發(fā)展了三代，但依然存在一定的缺陷，仍有待開發(fā)安全有效的新型溶栓劑。本研究旨在從微生物中開發(fā)出一種新型溶栓劑。
　　 從自然界分離的一株胞外產(chǎn)纖溶酶的芽孢桿菌B-60菌株，通過對(duì)它的形態(tài)、生理生化特征進(jìn)行研究，對(duì)其16S rDNA序列進(jìn)行測(cè)定與比

2、對(duì)，發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌B-60菌株與假蕈狀芽孢桿菌的形態(tài)、生理生化特征相符，與其16S rDNA序列也有高達(dá)99.38％的同源性。根據(jù)多相分類原則，認(rèn)為芽孢桿菌B-60菌株為假蕈狀芽孢桿菌（Bacillus pseudomycoides）。
　　 采用單因子試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)纖溶酶的假蕈狀芽孢桿菌B-60的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。產(chǎn)纖溶酶最佳條件為：蔗糖15 g/L，豆餅粉15 g/L，MnSO4·H2O3.4 g/L，CaCl23.3g/

3、L，K2HPO4·3H2O0.8 g/L，KH2PO40.2g/L，MgSO4·7H2O7.4 g/L；培養(yǎng)溫度32℃，培養(yǎng)基初始pH6.5～7.0，裝液量250 mL的三角瓶50 mL，接種量2％～6％，發(fā)酵時(shí)間56 h左右。Ca2+、Mg2+、K+、Mn2+對(duì)酶活有促進(jìn)作用，Zn2+、Fe2+對(duì)酶活有強(qiáng)烈抑制作用。優(yōu)化后，點(diǎn)樣10μL發(fā)酵液溶圈直徑為19.5mm，溶圈面積為298 m㎡。
　　 利用硫酸銨沉淀和陰離子交換色譜

4、從假蕈狀芽孢桿菌B-60菌株中分離純化出具有纖溶活性的單體蛋白單一組分（BpFE），并對(duì)BpFE性質(zhì)進(jìn)行分析。BpFE表觀分子量為34 kD。它在4℃～50℃活性較穩(wěn)定，50℃以上活性急劇下降；作用最適pH值為pH5～6，在pH5～10活性較穩(wěn)定，在pH3.0，活性幾乎喪失；金屬離子Ca2+，Mg2+，Mn2+對(duì)酶活有輕微促進(jìn)作用，Cu2+則強(qiáng)烈抑制酶活。苯甲基磺酰氟（PMSF）完全抑制它的活性。BpFE經(jīng)胰蛋白酶和胃蛋白酶降解后，活性