使用向肌細胞誘導(dǎo)分化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合藻酸鈣凝膠注射治療壓力性尿失禁的實驗研究.pdf

1、目的：
　　壓力性尿失禁(Stressurinaryincontinence,SUI)是女性泌尿外科常見疾病之一,嚴重地影響中老年女性的健康及生活質(zhì)量。我們擬在大鼠動物模型上,使用向肌細胞分化誘導(dǎo)的骨髓問充質(zhì)干細胞(Bonemarrowderiredmesenchymalstemcells,BMSCs)復(fù)合藻酸鈣凝膠(CalciumAlginate)注射于尿道周圍組織,以提高尿道阻力,并憑借誘導(dǎo)后干細胞的分化、增殖來修復(fù)退變的尿道

2、括約肌組織。本實驗作為研究課題的第二部分,研究目的在于建立可操作、穩(wěn)定的大鼠壓力性尿失禁動物模型,并評估向肌細胞分化誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合藻酸鈣凝膠治療壓力性尿失禁的效果。
　　材料和方法：
　　第一部分，大鼠壓力性尿失禁模型的建立和效果評價:
　　將18只6周齡雌性SD大鼠(體重范圍190～220g)隨機分成3組:模型組,假手術(shù)組及對照組。對模型組大鼠作雙側(cè)陰部神經(jīng)及盆底神經(jīng)肌支截斷,假手術(shù)組分離暴露上述神經(jīng)但不

3、作截斷,對照組大鼠不作特殊處理。術(shù)后2周以測定發(fā)生漏尿時的尿道內(nèi)壓力的方法評估3組大鼠的漏尿點壓力(Leakpointpressue,LPP)并作統(tǒng)計學(xué)分析。壓力測定后取正常大鼠及模型大鼠的尿道橫截面作組織學(xué)比較。
　　第二部分，大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及誘導(dǎo)后的肌樣細胞治療壓力性尿失禁的實驗研究:
　　從2周齡SD大鼠長骨骨髓中分離提取骨髓間充質(zhì)干細胞,在體外培養(yǎng)增殖。以5-氮雜胞苷10umol/L作用于P2代大鼠骨髓間充質(zhì)干

4、細胞24小時,誘導(dǎo)其向肌細胞分化,繼續(xù)培養(yǎng)3周后備用。將108只6周齡雌性SD大鼠(平均個體質(zhì)量205.36±10.60g)平均分為6組,首先全部以切斷雙側(cè)陰部神經(jīng)及盆底神經(jīng)肌支的方法建立壓力性尿失禁模型,術(shù)后2周時6組大鼠作分別處理:干細胞懸液組于膀胱頸尿道移行部2點、10點處注射大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞懸液,每點20ul;肌細胞懸液組于同樣部位同樣劑量注射肌樣細胞(經(jīng)向肌細胞分化誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細胞)懸液;同法,單純凝膠組注射單純藻酸

5、鈣凝膠,干細胞凝膠組注射骨髓問充質(zhì)干細胞復(fù)合藻酸鈣凝膠,肌細胞凝膠組注射肌樣細胞復(fù)合藻酸鈣凝膠。而空白對照組在解剖游離膀胱頸后不作注射。
　　將每組18只大鼠再分為3小組,分別于1周、4周、8周時間點測定漏尿點壓力,作統(tǒng)計學(xué)分析。取4周、8周大鼠的尿道橫截面作HE和Desmin染色作組織學(xué)比較。
　　結(jié)果：
　　第一部分:假手術(shù)組1只大鼠于術(shù)后1周死亡。余大鼠皆存活并順利測定漏尿點壓力。與正常大鼠相比,模型組大鼠平均漏

6、尿點壓力顯著下降(P=0.001),而假手術(shù)組大鼠與對照組大鼠平均漏尿點壓力無明顯差異(P=0.706)。組織學(xué)檢查顯示,與正常大鼠比較,模型組大鼠尿道橫紋肌排列致密性較差,而肌纖維也出現(xiàn)一定的萎縮。
　　第二部分:首先對比了首次測量與二次測量測得的漏尿點壓力,發(fā)現(xiàn)二者均值有差異,但沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.092)。因而采用兩次測量平均值計算,評估不同組間平均漏尿點壓力的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白對照組與單純凝膠組(P=0.007),干細

7、胞復(fù)合凝膠組(P=0.014)和肌細胞復(fù)合凝膠組(P=0.003)在平均漏尿點上有顯著性差異,而與干細胞懸液組、肌細胞懸液組無顯著性差異。空白對照組各時間點測得的平均漏尿點壓力無顯著差異。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)各組尿道橫截面標本在括約肌密度、肌肉纖維粗細上未發(fā)現(xiàn)明確的差異。單純凝膠組、干細胞凝膠組及肌細胞凝膠組4周、8周標本在連續(xù)切片中均發(fā)現(xiàn)了凝膠聚集區(qū)域,HE染色下3組凝膠形態(tài)相似,Desmin染色下單純凝膠組較其他兩組Desmin陽性表達明

8、顯減弱,Desmin染色下單純凝膠組的弱陽性表達與凝膠和染色劑粘附有關(guān)。各組4周與8周標本相比未見明顯差異。
　　結(jié)論：
　　通過切斷雙側(cè)陰部神經(jīng)和盆底神經(jīng)肌支,可建立穩(wěn)定的、較接近壓力性尿失禁的動物模型。
　　使用凝膠(單純凝膠或復(fù)合細胞凝膠)注射于尿道周圍可以提高壓力性尿失禁模型大鼠的漏尿點壓力,但壓力性尿失禁模型大鼠的漏尿點壓力的提高與凝膠體積效應(yīng)相關(guān)度大。
　　在注射后8周時,經(jīng)5-氮雜胞苷誘導(dǎo)的骨髓間充