貴州優(yōu)質高產(chǎn)茯苓菌株分離純化篩選及應用研究.pdf

1、真菌茯苓(Wolfiporia cocos(Schwein．)Ryvarden et Gilbn．)的干燥菌核，是我國珍貴的傳統(tǒng)中藥材。茯苓的藥用價值和營養(yǎng)價值極高，保健作用獨特，經(jīng)濟價值可觀，應用前景廣闊。 本試驗對采自貴州的10個野生茯苓菌核和3個人工栽培茯苓菌核進行組織分離，對所得分離菌株進行菌絲形態(tài)及熒光核染色顯微觀察；篩選適合其生長的最適母種、原種培養(yǎng)基。以13個茯苓野生及人工栽培菌核分離株、中國微生物菌種保管委員會收

2、錄菌株(6株)以及國內主栽品種(4株)作為試驗對象，對其進行菌絲生長初篩、原種培養(yǎng)復篩，篩選出黎13、臺17、劍19、劍20號4個優(yōu)質高產(chǎn)菌株，這4個菌株在野外栽培生產(chǎn)試驗中發(fā)菌情況良好，采收后測定菌核總重/蔸、結苓個數(shù)/蔸、最大個苓重、單蔸最高產(chǎn)量等產(chǎn)量指標，結果發(fā)現(xiàn)各項指標均優(yōu)于對照中5號菌株，結苓率為100％，4株菌株個苓形狀規(guī)則，肉質純白，無砂苓，無跑苓現(xiàn)象，結實程度(比重)較好，具有結苓性能好、產(chǎn)量高、質量好等特點。對上述4個

3、優(yōu)質高產(chǎn)菌株進行遺傳特性鑒定，結果顯示其遺傳穩(wěn)定。在上述試驗基礎上建立優(yōu)質高產(chǎn)菌株篩選模型，為今后茯苓菌株選優(yōu)及生產(chǎn)研究等提供現(xiàn)實依據(jù)。 測定供試菌株在木屑培養(yǎng)基上的生長速率及其向木屑培養(yǎng)基中分泌的CMC酶活力，并對兩者進行相關性分析，相關系數(shù)為0.951977，表明兩者間具有一定的相關性。但測定濾紙酶活力為陰性。 本試驗利用RAPD技術對23株供試菌株進行引物篩選，從41條引物中篩選了17條對供試菌株擴增重復性好、譜帶

4、清晰，具有一定多態(tài)性的引物，進而對10株外來菌株和貴州道地茯苓菌核分離株進行遺傳分析和鑒定，通過數(shù)據(jù)分析建立無根樹，探討其親緣關系。RAPD分析結果顯示不同來源的茯苓菌株親緣關系非常相近，但在某些引物的擴增物上存在較小的差異，所得聚類結果與23株菌株形態(tài)特征的鑒定結果基本一致。這表明采用RAPD技術對茯苓菌株的聚類分析有助于這些菌株親緣關系及同源性的研究，可為道地茯苓的檢測、鑒定提供分子生物學依據(jù)。 通過比較兩種保藏方法、不同保