產葡甘聚糖酶菌株的篩選及酶的分離純化.pdf

1、本文經過富集培養(yǎng)、分離純化，從土壤初步篩選出50株產葡甘聚糖酶的菌株；通過觀察平板培養(yǎng)基中水解圈的大小和透明程度，得到10株酶活較高的菌株；經過搖瓶復篩(用DNS法測定酶活力)，得到一株酶活力高、產酶較快的菌株(編號為DK3)。對DK3進行16S rDNA序列測定，并在互聯網上與其它菌株的相關序列進行比對，結果顯示DK3是一株成團泛菌(Pantoeaagglomerans)。 對DK3菌株所產葡甘聚糖酶的產酶條件進行了初步研究，

2、得到的最佳培養(yǎng)基配方為：葡甘聚糖0.6％，硝酸鈉0.3％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.3％，MgSO<,4>·7H2O 0.5％，KCI 0.5％，K<,2>HPO<,4> 0.1％，FeSO<,4>·7H<,2>O 0.001％，pH為6.0；最佳產酶條件為：接種量1％，發(fā)酵溫度37℃，搖床轉速1 60rpm。在此優(yōu)化條件下培養(yǎng)24h，菌液中的葡甘聚糖酶活力達58.54U/mL，是優(yōu)化前的1.27倍。 對葡甘聚糖酶的分離純化方法

3、進行研究：經超濾濃縮、陰離子交換柱層析和凝膠過濾柱層析，所得酶液在SDS-PAGE電泳圖譜中呈單一蛋白質區(qū)帶，分子量為54kDa。 對DK3菌株所產葡甘聚糖酶的酶學性質進行了初步研究，結果表明，酶促反應的最適溫度為37℃，最適pH為6.0；該酶在40℃以下較為穩(wěn)定，在pH5.0～9.0相對穩(wěn)定。Fe<'2+>、Cu<'2+>對該酶有強烈的抑制作用，EDTA有較強的抑制作用，NH<,4><'+>、Mg<'2+>有較弱的抑制作用，N