阿霉素化療耐藥通過激活信號傳導(dǎo)蛋白Smad3誘導(dǎo)富集CD133+肝癌干細(xì)胞.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活搠纛羔‰?，帨Y塋燃帑秈，硎，眥／7銘茄坼嬸堆務(wù)∞默另外，該學(xué)位論文為(憾辛加I廊桀≯方揚(yáng)菇軌擬l智聲課題(組)的研究成果，獲得(爰1司珥)課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在(帆蠶亍易腫脆訃礴實(shí)驗(yàn)室完成。(請?jiān)谝陨侠ㄌ杻?nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)

2、人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特聲明人(簽名)：菇扛素歷、砌l∑年多只’日摘要摘要化療是晚期肝癌患者輔助治療的重要方法之一，但其效果不理想，腫瘤耐藥性的產(chǎn)生是重要原因之一。目前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞與化療耐藥性產(chǎn)生密切相關(guān)。因此，研究肝癌化療耐藥與肝癌干細(xì)胞之間的相關(guān)性并闡明其耐藥機(jī)制，可以為晚期肝癌的治療尋找新的有效治療靶點(diǎn)。本研究通過運(yùn)用化療藥物阿霉素(ADM)梯度溶度作用Huh751肝癌細(xì)胞，誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞株Huh751／

3、ADM的形成，通過檢測比較Hull751／ADM與Huh751細(xì)胞之間表面標(biāo)記物CDl33的表達(dá)差異及信號傳導(dǎo)蛋白Smad3的表達(dá)變化，并測試運(yùn)用Smad3特異性抑制劑SIS3作用后耐藥細(xì)胞株CDl33表達(dá)的逆轉(zhuǎn)情況，初步探索化療是否可以誘導(dǎo)富集肝癌干細(xì)胞及其作用機(jī)制和尋找相關(guān)靶點(diǎn)。采用化療藥物梯度濃度誘導(dǎo)法作用于Huh751肝癌細(xì)胞，經(jīng)歷12個(gè)月構(gòu)建相對穩(wěn)定表達(dá)CDl33表面標(biāo)記物的耐藥細(xì)胞株Huh751／ADM。通過CcK8實(shí)驗(yàn)分析

4、比較Huh751和Huh751／ADM之間的對不同化療藥物的敏感性，qI盯一PCR比較兩者之間相關(guān)干性基因的表達(dá)差異，流式細(xì)胞儀分析比較兩者之間細(xì)胞凋亡以及肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)記物CDl33分子的表達(dá)差異。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察Huh751和Huh751／ADM的增殖狀況。WestemBlotting檢測Smad3、pSmad3及各凋亡蛋白的表達(dá)情況以及使用Smad3特異性抑制劑sis3作用于Huh751／ADM穩(wěn)定的細(xì)胞株之后信號通路上各相

5、關(guān)蛋白的表達(dá)變化，并檢測其對化療藥物的敏感性，分析運(yùn)用SIS3后細(xì)胞干性變化。實(shí)驗(yàn)證明，運(yùn)用ADM梯度濃度誘導(dǎo)Huh751細(xì)胞后建立了相對穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞株Hull751／ADM，成功富集了CDl33標(biāo)記的干細(xì)胞，且pSmad3蛋白表達(dá)增強(qiáng)，運(yùn)用SIS3后，成功逆轉(zhuǎn)了CDl33的表達(dá)比例及干性的表達(dá)能力。綜上，ADM化療耐藥成功誘導(dǎo)富集了CDl33肝癌干細(xì)胞，且通過激活信號傳導(dǎo)蛋白Smad3作用，SIS3靶向此位點(diǎn)具有逆轉(zhuǎn)肝癌干細(xì)胞的作用