腫瘤組織中Midkine的高效檢測及其新剪切型的發(fā)現(xiàn).pdf

1、廈門大學碩士學位論文腫瘤組織中kine的高效檢測及其新剪切型的發(fā)現(xiàn)姓名：陶萍申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：李博安李智星20061201摘要性腫瘤組織中都有很高的表達，(2)而且MK的截短型(truncated，tMK)在癌細胞系惡性腫瘤組織中達到100％的檢出率(先前的檢出率僅60％左右)。已有不少研究表明，tMK是一種缺少外顯子III編碼的N結構域及其周圍序列的MK變異體，具有腫瘤特異性。tMK被普遍認為參與腫

2、瘤的發(fā)生和發(fā)展，并因其在人類組織中的表達僅限于癌癥組織而被認為可以作為檢測癌癥的一種有效的標志。因此，我們的實驗中這種簡單易行的方法，大大提高了tMK成為一個有效可行的癌癥臨床診斷標志物的可行性；(3)在肝癌手術的癌旁組織中發(fā)現(xiàn)有MK的高表達和tMK的表達，這與免疫組化的結果一樣都證明了MK在癌癥的發(fā)生、轉移和侵入中起到了重要的作用，因此MK及其tMK具有可開發(fā)為癌癥的早期檢測標志物的可能性，這對于癌癥腫瘤的有效檢測與治療都是非常有利的

3、；(4)隨后，用同樣的技術，由于靈敏度和專一性的提高，我們首次發(fā)現(xiàn)了在人癌癥組織及其癌細胞中，MK的另外兩種新截短型，分別稱tMKB和tMKC。之前己經發(fā)現(xiàn)并報道過的這種截短型稱tMKA。它們的mRNA大dN序是：tMKAtMKBtMKC。值得一提的是，之前在小鼠胚胎中也發(fā)現(xiàn)MK的三種截短型，其剪切形式與本文中的三種人類tMK十分相似；而疾病中的tMK又有明顯變異。這可能為研究MK在病變中的功能，提供重要線索；(5)一個顯著的特點是，這

4、些tMK的剪切位點序列具有特異性，3’和5’端剪切位點堿基序列完全相同，如3’和5’端剪切位點序列都為ACCCCC。有趣的是這與之前在小鼠胚胎中發(fā)現(xiàn)的3種新的tMK是類似的剪切模式，也是具有此類序列專一性的mRNA剪切模式：這提示著，可能存在一種新型的mRNA剪切模式：(6)從基因結構上比較，tMKA缺失了整個外顯子III，tMKB缺失了整個外顯子III和IV的一部分，tMKC缺失了外顯子III和IV的各一部分。對比之前在小鼠胚胎中也發(fā)

5、現(xiàn)的三種tMi，可能為挖掘MK在正常發(fā)育和病變中的分子機制，提供新思路；(7)最后，我們運用實時定量(RealTime)PCR的方法，發(fā)現(xiàn)MK及tMK的表達量與腫瘤／癌癥發(fā)生在量上的相關性，即MK，tMK在正常，病變前期和疾病組織中表達量的相關性：不僅進一步確證了，MK表達與疾病的關系，并為將來從量上，可能把MK、tMK表達量的檢測用于臨床上診斷疾病的嚴重程度，提供有利的數(shù)據(jù)。總結這方面的研究，我們不僅優(yōu)化檢測技術，使之更加靈敏，從而可