腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2對(duì)水鈉代謝和血壓調(diào)節(jié)的影響.pdf

1、第一部分自發(fā)性高血壓大鼠(SHR大鼠)腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2對(duì)水鈉代謝及血壓的影響。 目的：以往研究顯示腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2(Cyclooxygenase 2，COX2)有可能參與水鹽代謝及血壓的調(diào)節(jié)，為此本研究選擇先天性高血壓動(dòng)物模型，即自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR)作為對(duì)象，觀察腎臟內(nèi)髓COX2的表達(dá)以及不同鹽負(fù)荷狀態(tài)下COX2的改變。 方法：6周齡SHR大鼠及其對(duì)

2、照WKY大鼠各12只，隨機(jī)分為低鹽組和高鹽組(WKY-LS組，WKY-HS組，SHR-LS組，SHR-HS組)，分別給予高鹽(含8％NaCl)和低鹽(含0.04％NaCl)飲食3天，觀察基礎(chǔ)狀態(tài)及不同鹽負(fù)荷前后大鼠尾動(dòng)脈收縮壓、血鈉濃度、24小時(shí)尿量(UV)、尿鈉(UNa)以及COX2代謝物6-keto prostaglandin F1a(6k-PGF1a)排泄情況，應(yīng)用免疫組化和Western Blot的方法檢測(cè)腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表

3、達(dá)，分析COX2表達(dá)水平與UV、UNa，的相關(guān)性。 結(jié)果：基礎(chǔ)狀態(tài)下，SHR大鼠尾動(dòng)脈收縮壓明顯高于WKY大鼠。給予不同鹽負(fù)荷3天后，WKY大鼠收縮壓無(wú)明顯改變，SHR低鹽組收縮壓無(wú)變化，但SHR高鹽組收縮壓明顯升高。給予低鹽飲食的各組大鼠血鈉濃度無(wú)顯著差別，但高鹽飲食組SHR大鼠血鈉濃度顯著高于WKY大鼠，也較SHR低鹽組顯著升高。與各自基礎(chǔ)狀態(tài)相比，低鹽飲食后兩種大鼠的24h尿量(UV)和24h尿鈉(UNa)排泄顯著降低，高

4、鹽飲食后則顯著增加；SHR大鼠的UV和UNa排泄在高鹽狀態(tài)下與WKY大鼠相比明顯低下。SHR和WKY大鼠尿COX2代謝物6k-PGF1a的排泄對(duì)鹽負(fù)荷的反應(yīng)也類似，高鹽組均較低鹽組明顯增加，但同樣鹽負(fù)荷狀態(tài)下兩組之間無(wú)差別。免疫組化顯示腎臟內(nèi)髓COX2主要表達(dá)于髓質(zhì)間質(zhì)細(xì)胞，基礎(chǔ)狀態(tài)下SHR與WKY大鼠無(wú)顯著差異，給予低鹽飲食后亦無(wú)顯著改變，但給予高鹽飲食后無(wú)論是WKY大鼠還是SHR大鼠腎臟內(nèi)髓COX2表達(dá)均顯著增加。Western B

5、lot進(jìn)一步證實(shí)高鹽可誘導(dǎo)WKY及SHR大鼠腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達(dá)較低鹽組顯著增加，但WKY和SHR大鼠之間無(wú)顯著差異。 結(jié)論:SHR大鼠腎臟水鹽排泄功能受損，高鹽飲食后血壓進(jìn)一步升高，水鈉潴留，同時(shí)伴有腎臟內(nèi)髓COX2表達(dá)升高；但不同鹽負(fù)荷對(duì)SHR大鼠腎臟內(nèi)髓COX2表達(dá)的影響與WKY大鼠相同；提示腎臟內(nèi)髓COX2參與了水鹽代謝的調(diào)節(jié)，且在SHR大鼠中表達(dá)正常，可能并非該動(dòng)物模型高血壓形成及水鈉潴留的關(guān)鍵因素。 第二

6、部分自發(fā)性2型糖尿病模型(OLETF大鼠)腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2對(duì)水鈉代謝及血壓的影響。 目的:大量臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)肥胖和高血壓明顯相關(guān)，但目前肥胖致高血壓的機(jī)制尚未完全闡明。因此，本部分即選用肥胖性高血壓動(dòng)物模型，即自發(fā)性2型糖尿病OLETF大鼠(Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty rat)作為研究對(duì)象，觀察腎臟內(nèi)髓COX2在不同鹽負(fù)荷和全身應(yīng)用環(huán)氧化酶-2選擇性抑制劑(selective COX

7、2 inhibitor，coxib)時(shí)的表達(dá)情況及其在肥胖性高血壓發(fā)病中的意義。 方法：14周齡OLETF大鼠及其對(duì)照LETO大鼠各24只，監(jiān)測(cè)體重、血糖及血壓變化，至30周齡成模時(shí)隨機(jī)分為低鹽組、高鹽組、低鹽+塞萊昔布(celecoxib)組和高鹽+塞萊昔布組(LETO-LS組，LETO-HS組，LETO-LS+celecoxib組，LETO-HS+celecoxib組，OLETF-LS組，OLETF-HS組，OLETF-LS

8、+celecoxib組，OLETF-HS+celecoxib組)。在低鹽(含0.04％NaCl)飲食誘導(dǎo)4天后分別再給予高鹽(含8％NaCl)和低鹽飲食3天。觀察不同鹽負(fù)荷前后大鼠血脂、脂肪細(xì)胞因子、收縮壓、血鈉濃度、24小時(shí)尿量(UV)、尿鈉(UNa)以及COX2代謝物6k-PGF1a排泄情況，應(yīng)用Western Blot的方法檢測(cè)腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達(dá)，最后分析各指標(biāo)的相關(guān)性。 結(jié)果：30周齡時(shí)，OLETF大鼠體重、餐后血

9、糖、血脂和血壓均明顯高于相同年齡的LETO大鼠。給予不同鹽負(fù)荷或鹽負(fù)荷合并應(yīng)用塞萊昔布3天后，兩種大鼠血壓均無(wú)明顯改變。兩種大鼠每日攝鈉總量無(wú)差別，但高鹽組均顯著高于低鹽組。給予低鹽飲食的各組大鼠血鈉濃度無(wú)顯著差別，但高鹽飲食組OLETF大鼠血鈉濃度顯著高于LETO大鼠，也較OLETF低鹽組顯著升高；塞萊昔布組大鼠血鈉濃度未見(jiàn)升高。高鹽飲食顯著增加各組大鼠的尿量和尿鈉，使用塞萊昔布，對(duì)低鹽飲食的兩種大鼠影響較??；高鹽飲食時(shí)兩種大鼠表現(xiàn)相

10、反，LETO大鼠尿鈉和尿量變化迅速且增幅大，OLETF大鼠則反應(yīng)遲緩，且出現(xiàn)下降。OLETF和LETO大鼠尿COX2代謝物6k-PGF1a的排泄對(duì)鹽負(fù)荷的反應(yīng)也類似，高鹽組均較低鹽組明顯增加，但同樣鹽負(fù)荷狀態(tài)下兩組之間無(wú)差別；應(yīng)用塞萊昔布后，兩種大鼠尿COX2代謝物6k-PGF1a的排泄明顯下降。Western Blot證實(shí)OLETF大鼠腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達(dá)無(wú)論在低鹽、高鹽，還是應(yīng)用塞萊昔布時(shí)都顯著高于LETO大鼠；兩種大鼠在高鹽飲

11、食及口服塞萊昔布誘導(dǎo)下腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達(dá)顯著增加。 結(jié)論：OLETF大鼠腎臟尿鈉排泄功能受損，存在水鈉潴留伴血壓升高；其腎臟內(nèi)髓COX2表達(dá)顯著升高，可能是代償性的增加以促進(jìn)水鈉排泄。應(yīng)用塞萊昔布后，腎臟內(nèi)髓COX2表達(dá)可反饋性表達(dá)上調(diào)，但代謝產(chǎn)物顯著下降，提示其生物功能受到抑制，OLETF大鼠水鈉排泄下降，水鈉潴留加重，在用藥早期和低鹽飲食時(shí)這一副作用最為明顯，提示腎臟內(nèi)髓COX2參與了水鹽代謝的調(diào)節(jié)，尤其是在低鹽飲食時(shí)